[發明專利]一種降低血總膽固醇的免疫調節劑及其給藥方式

無效

• 申請號: 201010133801.7
• 申請日: 2010-03-29
• 公開（公告）號: CN101874897A
• 公開（公告）日: 2010-11-03
• 發明（設計）人: 劉景晶;張宇;胡向兵;張會勇;魯勇;曹榮月;李泰明
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: A61K39/04
• 分類號: A61K39/04;A61P3/06;A61P37/02
• 代理公司: 暫無信息
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技術領域

本申請涉及心血管疾病領域。具體地說，本發明涉及牛結核分枝桿菌熱休克蛋白65及含有完整牛結核分枝桿菌熱休克蛋白65的蛋白組合物在治療和/或預防動脈粥樣硬化中的應用。

背景技術

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是常見的心血管疾病之一，也是現代死亡率最高的疾病之一。動脈壁上大量脂質的積聚是動脈粥樣硬化的主要表征，它同時也是一種慢性炎癥過程，天然免疫和適應性免疫反應不僅參與動脈粥樣硬化斑塊的形成，而且侵蝕動脈壁，降低動脈彈性，影響血液流動。動脈粥樣硬化斑塊往往使動脈管腔變窄，進一步誘發血栓栓塞，造成局部缺血，有時還會導致血流灌注區的組織萎縮。嚴重后果包括缺血造成的心絞痛、心衰竭。

HSP65/60分子屬于HSP60家族，分子量60kDa左右，是生物體應對外界刺激發生反應而表達的應激蛋白，在進化上高度保守。人源HSP60和結核分枝桿菌HSP65大約具有50％的同源性。當病原體侵入時，機體的免疫系統針對病原體產生抵抗性的免疫應答，這時針對菌源HSP65的免疫反應賦予機體抗感染的能力，但同時由于人源HSP60和微生物源HSP65分子的高度同源性，免疫系統在識別菌源HSP65的同時也可能針對自身的HSP60產生應答，這種交叉免疫反應使得HSP65/60分子成為了一種危險的自身抗原。以往的研究證明HSP65/60分子是AS的一個主要自身抗原。在AS患者或AS模型動物血清中都檢測到針對HSP65/60的抗體，抗體滴度與疾病的嚴重程度呈正相關。在AS斑塊中也檢測到大量針對HSP65/60的T細胞。覆蓋有AS斑塊的血管內皮處存在大量表達HSP60的內皮細胞、巨噬細胞和平滑肌細胞。在用重組HSP65或含有HSP65的卡介苗免疫動物時發現可明顯促進AS的發生。抗HSP65/60分子的抗體被證明對內皮細胞和巨噬細胞具有直接的損傷作用，這種細胞毒性很可能誘導和加速了AS。

隨著對HSP65/60與AS關系研究的深入，人們開始嘗試用HSP65/60分子開發自身抗原疫苗來預防AS的發生。當AS發生時，機體內可以檢測到Th1型細胞因子γ-干擾素(interferon-γ，IFN-γ)、白介素(interleukin，IL)-12的升高，同時伴隨Th2型細胞因子IL-4、IL-5和IL-10的降低。因此AS被認為是一種Th1型免疫應答過于亢進而造成的自身免疫性疾病，針對這種Th1偏向性的自身免疫性疾病，預防和治療的原則應當以抑制Th1型免疫應答為首要任務。通常有兩種方法：一是誘發免疫耐受，即誘導針對自身抗原的全面無應答狀態；二是誘導免疫應答由Th1向Th2漂移，即誘導體內針對自身抗原的免疫調節反應，使得Th2型應答上調，利用Th2型應答對Th1型應答的抑制能力來達到預防疾病的目的。這兩種方法都被廣泛地應用于自身免疫性疾病的預防，但從免疫途徑和免疫策略上兩者并沒有特定的區別，主要還是與具體的疾病和抗原有關。

在AS的預防上，已有實驗證明鼻腔或口服免疫HSP65分子可以抑制低密度脂蛋白受體缺陷型(low-density?lipoprotein?receptor?deficient，LDL-RD)小鼠上AS的發生，這主要是通過抑制Th1偏向性免疫反應達到的。

血脂異常是誘發AS的傳統危險因素之一，研究發現血脂異常除了與飲食、遺傳相關外，感染、炎癥等因素也會導致血脂異常。感染、炎癥導致的急性時相反應(acute-phase?response，APR)可以影響體內脂質和脂蛋白的代謝：升高甘油三酯水平、促進肝臟脂肪酸和膽固醇合成、抑制脂肪酸的氧化、降低脂蛋白脂肪酶活性、降低LDL的清除率、抑制膽固醇的逆向轉運等等。這些變化可能是由感染過程中所分泌的炎癥性細胞因子所介導產生的，而脂質代謝的異常最終促進了AS的發展。Xu等人用HSP65混合佐劑皮內免疫新西蘭大白兔，在觀察到AS斑塊程度加重的同時也發現了家兔血清中膽固醇水平的升高，這說明HSP65相關的炎癥性免疫應答也可以對動物的血脂代謝造成影響。

發明內容

本發明的目的是提供一種降低血清總膽固醇的免疫調節劑

本發明的又一目的是提供該免疫調節劑的給藥途徑及劑量

本發明的最終目的是公開該免疫調節劑的用途

在本發明的第一方面，提供牛結核分枝桿菌熱休克蛋白65(表示為HSP65，國際基因庫登錄號是M17705)作為降低低密度脂蛋白-膽固醇的免疫調節劑。作為本發明的第一個實施實例，本免疫調節劑是利用基因工程手段通過可溶性表達而獲得的HSP65，步驟包括：

(1)HSP65基因的設計與獲得