[發(fā)明專利]片葉苔素D在制備抗腫瘤藥物和抗腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010132942.7
• 申請(qǐng)日: 2010-03-26
• 公開（公告）號(hào): CN101780068A
• 公開（公告）日: 2010-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 婁紅祥;孫斌;薛霞;沈濤;李霞;范培紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/335
• 分類號(hào): A61K31/335;A61P35/00
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及片葉苔素D的一種新用途，尤其涉及其在制備抗腫瘤藥物和抗腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤，是目前嚴(yán)重危害人類健康和生活質(zhì)量的一類疾病，抗腫瘤藥物的發(fā)現(xiàn)與研制一直是藥物研究人員們的工作重點(diǎn)與熱點(diǎn)。目前我國患腫瘤人數(shù)眾多，每年死于腫瘤的人數(shù)超過160萬。在近二十年來，我國腫瘤死亡率上升了29.42％。在35～59歲的中壯年人群中，腫瘤列居各類死因之首，已成為造成我國最佳勞動(dòng)力損失的重要原因。因此開發(fā)和研制新型抗腫瘤藥物是一件具有極其重要意義的工作。

我國現(xiàn)已批準(zhǔn)上市的抗腫瘤藥物大約有200多種，但隨著腫瘤化療藥物的廣泛應(yīng)用，腫瘤的多藥耐藥性問題越來越突出，已成為腫瘤化療失敗最常見而又最難解決的問題之一，據(jù)估計(jì)90％以上的腫瘤患者死于不同程度的耐藥。腫瘤的多藥耐藥性(multiple?drug?resistance，MDR)是指腫瘤細(xì)胞接觸某種抗腫瘤藥物后，不僅對(duì)該藥物產(chǎn)生耐藥性，而且對(duì)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的多種抗腫瘤藥物產(chǎn)生交叉耐藥，從而大大降低了抗腫瘤藥物的療效。因此發(fā)現(xiàn)和研究新型多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑同樣具有非常重要而又深遠(yuǎn)的意義。

天然產(chǎn)物一直是抗腫瘤藥物的重要來源之一，如紫杉醇，長春新堿等。

片葉苔素D是從干地錢(Marchantia?polymorpa?L.)中分離得到的環(huán)狀雙聯(lián)芐類化合物，呈無色塊狀結(jié)晶，分子式為C₂₈H₂₄O₄，分子量為424，熔點(diǎn)為194-196℃，易溶于氯仿、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑中，結(jié)構(gòu)式如下：

目前，在檢索的諸多報(bào)道中，未見有片葉苔素D在抗腫瘤和腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)方面的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了片葉苔素D的一種新用途，即：片葉苔素D在制備抗?腫瘤藥物中的應(yīng)用，和在制備抗腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)藥物中的應(yīng)用。

以片葉苔素D進(jìn)行對(duì)DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(TopoI)和拓?fù)洚悩?gòu)酶II(TopoII)活性的測(cè)定，片葉苔素D可以選擇性地抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II的活性。TOPOII有TopoIIα和TopoIIβ兩種亞型，腫瘤組織內(nèi)TopoIIα高表達(dá)，臨床上已逐漸以TopoIIα表達(dá)水平高低來判斷腫瘤的增殖程度。TopoIIβ與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系目前還不太明確。實(shí)驗(yàn)顯示片葉苔素D?10μM，20μM，30μM可分別降低TopoIIα基因表達(dá)40％，51％，52％。

取慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系K562及其耐藥株K562/A02，2×10⁴/孔接種于96孔板中，分別加入不同濃度的阿霉素和較低濃度(2、4和8μg/ml)的片葉苔素D，培養(yǎng)48h。以MTT法測(cè)定加入片葉苔素D后，阿霉素對(duì)耐藥細(xì)胞株K562/A02的抑制作用，結(jié)果表明8μg/ml片葉苔素D對(duì)腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)達(dá)8.5。P-糖蛋白泵出實(shí)驗(yàn)表明片葉苔素D會(huì)對(duì)P-糖蛋白活性的產(chǎn)生抑制。

由上述研究結(jié)果可知，片葉苔素D能夠抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II基因α亞型的表達(dá)，并且能夠選擇性的抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II的活性，具有明顯的抗腫瘤作用，同時(shí)該化合物還可抑制P-糖蛋白，表現(xiàn)出較好的腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)活性，是一種非常具有開發(fā)前景的化療藥物，可以以其為主成分制備抗腫瘤口服制劑、注射劑，多藥耐藥逆轉(zhuǎn)口服制劑、注射劑等。

附圖說明

圖1為瓊脂糖凝膠電泳示意圖(拓?fù)洚悩?gòu)酶I)；

圖2為瓊脂糖凝膠電泳示意圖(拓?fù)洚悩?gòu)酶II)；

圖3為片葉苔素D對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶II基因中α亞型表達(dá)的抑制作用示意圖；

圖4為片葉苔素D對(duì)K562/A02細(xì)胞的生長抑制作用示意圖；

圖5為K562/A02細(xì)胞中加入不同濃度的片葉苔素D后對(duì)羅丹明123熒光強(qiáng)度的影響示意圖；

圖6為片葉苔素D對(duì)K562/A02細(xì)胞將羅丹明123泵出效果的影響示意圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明：

實(shí)施例1：片葉苔素D對(duì)DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(TopoI)和拓?fù)洚悩?gòu)酶II(TopoII)活性的測(cè)定

(1)片葉苔素D的配成：

用分析天平秤取5mg片葉苔素D，加入DMSO(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí))1179.24μl，得到10mM貯存液，保存于-20℃(臨用時(shí)用培養(yǎng)基稀釋成所需濃度)。

(2)DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的提取：