[發(fā)明專利]一種基于擬南薺菜的輻射旁效應(yīng)早期過程驗證實驗方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010132810.4
• 申請日: 2010-03-22
• 公開（公告）號: CN101805791A
• 公開（公告）日: 2010-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王婷;李方華;卞坡;吳躍進(jìn)
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院等離子體物理研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

1.一種基于擬南薺菜的輻射旁效應(yīng)早期過程驗證實驗方法，其特征在于： 采用模式植物擬南薺菜的轉(zhuǎn)基因系為材料，所述轉(zhuǎn)基因系為 AtRAD54Promoter-GUS轉(zhuǎn)基因系，對擬南薺菜進(jìn)行電離輻射后，進(jìn)行剪切和嫁 接處理，提取嫁接至受輻射的擬南薺菜根尖的新的擬南薺菜幼苗的AtRAD54基 因，以所述AtRAD54基因表達(dá)水平作為檢測終點，包括以下步驟：

(1)實驗材料培養(yǎng)：將擬南芥菜幼苗消毒后點播在MS培養(yǎng)基上，在光照 條件下豎直培養(yǎng)，擬南芥菜幼苗的根部沿培養(yǎng)基表面向下豎直生長；

(2)輻射處理：采用物理輻射手段，對擬南芥菜幼苗的根尖部位進(jìn)行局部 電離輻射；

(3)剪切處理：用手術(shù)刀片切掉擬南芥菜幼苗的根尖部位受輻照的部分， 剩余的植株轉(zhuǎn)移到新的MS培養(yǎng)基上繼續(xù)生長；

(4)嫁接處理：將剪切處理后的擬南芥菜幼苗受輻照的根尖部位轉(zhuǎn)移到新 的MS培養(yǎng)基上，根尖向下豎直放置；選擇新的擬南芥菜幼苗，剪掉相同長度的 根尖后，將根向下豎直放直，并和受輻照的南芥菜幼苗根尖部分整齊對接，新的 擬南芥菜幼苗剩余的根能向下緩慢生長，兩部分根在交界面緊密接觸；

(5)地上部分植株輻射效應(yīng)的檢測：在剪切和嫁接處理完成24小時后，提 取未受輻照的，并且嫁接至受輻射的擬南芥菜幼苗根尖的新的擬南芥菜幼苗的地 上組織器官的AtRAD54基因，并同源重組修復(fù)相關(guān)基因AtRAD54基因啟動子驅(qū) 動的GUS報告基因作為表達(dá)，通過GUS報告基因判斷所述AtRAD54基因表達(dá) 是否明顯上調(diào)，作為輻射生物效應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于擬南薺菜的輻射旁效應(yīng)早期過程驗證實 驗方法，其特征在于：所述MS培養(yǎng)基中含有3％的糖。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于擬南薺菜的輻射旁效應(yīng)早期過程驗證實 驗方法，其特征在于：所述步驟(2)采用低穿透能力的alpha粒子對擬南芥菜 幼苗的根尖部位進(jìn)行局部電離輻射。