[發明專利]處理鋼渣、醋糟和風化煤的專用微生物菌種及其制備方法

無效

• 申請號: 201010130284.8
• 申請日: 2010-03-23
• 公開（公告）號: CN101787351A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 張福亮;高亮;丁春明
• 申請（專利權）人: 山西晨雨科技開發連鎖經營有限公司
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C12N1/14;C12N1/16;C12N1/18;C12N1/20;B09B3/00;C12R1/78;C12R1/84;C12R1/865;C12R1/645;C12R1/125;C12R1/10;C12R1/11;C12R1
• 代理公司: 太原同圓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14107
• 代理人: 王金鎖

1.一種處理鋼渣、醋糟和風化煤的專用微生物菌種，其特征是該微生物菌種異常漢遜酵母、壓膜漢遜酵母、粉狀畢赤酵母、釀酒酵母、白地霉、枯草芽孢桿菌枯草亞種、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、嗜酸乳酸菌、細黃鏈霉菌的質量比為2∶2∶2∶2∶1∶5∶3∶2∶1∶4。

2.根據權利要求1所述的處理鋼渣、醋糟和風化煤的專用微生物菌種，其特征是微生物菌種為灰褐色，呈松散狀。

3.根據權利要求1所述的處理鋼渣、醋糟和風化煤的專用微生物菌種，其特征是微生物菌種有效活菌總數≥10億個/g，水分≤20％，pH值為6.8-7.5。

4.根據權利要求1所述的處理鋼渣、醋糟和風化煤的專用微生物菌種，其特征是上述各微生物載體均為經粉碎過80目篩并經高溫滅菌后的硅藻土和米糠，硅藻土和米糠的質量比為2∶1。

5.一種處理鋼渣、醋糟和風化煤的專用微生物菌種的制備方法，其特征是它包括以下步驟：

(1)選取微生物，分別選取異常漢遜酵母〔Hensenula?anomala(E.C.Hansen)Syd.&P.Syd.〕、壓膜漢遜酵母(Hansenula?subpelliculosa?Bedford)、粉狀畢赤酵母〔Pichia?farinosa(Lindner)Sacc.〕、釀酒酵母(Saccharomyescerevisiae?Meyen?ex?E.C.Hansen)、白地霉(Geotrichum?candidum?Link)、枯草芽孢桿菌枯草亞種〔Bacillus?subitilissubsp.Subtilis(Ehrenberg)Cohn〕、地衣芽孢桿菌〔Bacilluslicheniformis(Weimann)Chester〕、巨大芽孢桿菌(Bacillus?megaterium?deBary)、嗜酸乳酸菌〔Lactobacillus?acidophilus(Moro)Hansen?and?Mocquot〕和細黃鏈霉菌〔Streptomyces?microflavus(Krainsky)Waksman?and?Henriciemend.Lanoot?et?al.〕，上述所用菌種均在中國科學院微生物研究所中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)保藏，其保藏編號分別為CGMCC2.296，CGMCC2.770，CGMCC2.1908，CGMCC2.53，CGMCC2.361，CGMCC1.892，CGMCC1.813，CGMCC1.2393，CGMCC1.2686和CGMCC4.891；

(2)活化，在無菌條件下，用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安醅管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使其破裂，用鑷子敲下已經破裂的安醅管頂端，用無菌吸管吸取0.3-0.5ml適宜的液體培養基，滴入安醅管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀，吸取全部菌體懸浮液，分別移植于2支斜面培養基試管中培養激活，使之具有良好的繁殖能力；

(3)一級擴大，對于酵母菌，培養基：磷酸氫二銨1g，氯化鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，豆芽汁10ml，瓊脂18-20g，水1000ml，pH值7.0，加12ml?0.04％溴甲酚綠(pH值5.2-6.8，顏色由黃色變紫色，作指示劑)于1.05kg/cm²，121.3℃下滅菌20分鐘；取出后放成斜面，無菌下接種經篩選鑒定的酵母菌原種，放置在恒溫箱中，保持溫度32℃，培養48-72小時；菌苔表面菌絲生長豐滿，呈現乳白色，即可取出用作二級菌種生產；對于細菌，選用牛肉膏蛋白胨培養基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，瓊脂18-20g，水1000ml，pH值7.2～7.4，培養溫度30℃，其它同上；對于放線菌，培養基：馬鈴薯200g，葡萄糖50g，硫酸鎂0.4g，磷酸氫二鉀0.4g，蛋白胨1g，瓊脂18g，水1000ml，pH值7.2～7.4，于1.05kg/cm²，121.3℃下滅菌30分鐘；取出后放成斜面，無菌下接種經篩選鑒定的可用于生物除臭的細黃鏈霉菌原種GS12-7-12，放置在恒溫箱中，保持溫度32℃，培養48～72小時，菌苔表面孢子生長豐滿，呈現銀灰色，并有露珠，即可取出用作二級菌種生產；

(4)二級搖床擴大，對于酵母菌，選用PD培養基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000ml，pH值自然；高壓滅菌技術同上，培養溫度35℃±0.5℃，培養時間24-48小時；對于細菌，選用PD培養基或PS培養基，即葡萄糖可用蔗糖代替，其它同上；對于放線菌，二級擴大培養基：淀粉20g，葡萄糖10g，花生餅粉20g，硫酸鎂0.25g，磷酸氫二鉀0.2g，蛋白胨4g，硫酸銨2.5g，水1000ml，用5％NaOH溶液調節pH值7.5～8；先將培養基配好，開始用少量水調成糨糊狀，加足水放在不銹鋼中煮開，裝在1000ml三角瓶中，每瓶裝200ml，用二層紗布中間包一層棉花扎好瓶口經121.3℃高溫滅菌30分鐘，取出降溫至40℃，從一級菌種中接種，放置在搖床上振蕩培養16～24小時，此時孢子從萌發進入菌絲形成階段，在正常情況下，菌絲生長良好，菌液黏稠，有少量泡沫，呈微紅色，有冰片氣味，即可進入搖床擴大；搖床擴大，培養基：玉米粉10g，甘薯粉20g，葡萄糖10g，花生餅粉30g，蛋白胨1g，硫酸銨2.5g，碳酸鈣5g，采用種子罐培養，高溫滅菌同上，接種二級菌種，接種量0.5％～1％；發酵罐溫度32℃±0.5℃，通氣量1∶0.5(體積比)連續攪拌，經常檢查各閥門是否嚴密，否則使蒸汽水進入罐內造成菌絲生長不良，培養36小時，菌液黏稠，有泡沫呈微紅色即可使用；

(5)載體吸附，在無菌條件下，將菌液分別導入經粉碎過80目篩并經高溫滅菌后的硅藻土和米糠吸附，硅藻土和米糠的質量比為2∶1，保證其有效活菌數在10億個/g；

(6)配制，微生物菌種組配是按照質量比異常漢遜酵母、壓膜漢遜酵母、粉狀畢赤酵母、釀酒酵母、白地霉，枯草芽孢桿菌枯草亞種、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、嗜酸乳酸菌、細黃鏈霉菌為2∶2∶2∶2∶1∶5∶3∶2∶1∶4的比例進行配制；

(7)低溫干燥，為了保證微生物的活力，干燥時，物料溫度不高于50℃，干燥時間不超過15分鐘；

(8)檢測，有效活菌數采用平板計數法測定；

(9)計量包裝，采用電子或磅秤計量，誤差500±0.05g，1000±0.1g，采用塑料袋真空包裝，在0-4℃下保存。