[發明專利]抗腫瘤重組質粒、基因疫苗及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 201010129207.0
• 申請日: 2010-03-18
• 公開（公告）號: CN102191271A
• 公開（公告）日: 2011-09-21
• 發明（設計）人: 彭景楩;夏紅飛;王榮春;劉震坤;楊穎;熊高風;孫敬
• 申請（專利權）人: 中國科學院動物研究所
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/12;C12N1/21;C12N5/10;A01K67/027;A61K48/00;A61P35/00;A61P15/00
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 劉丹妮;郭廣迅

技術領域

本發明屬于生物與現代農業技術領域，涉及一種抗腫瘤基因疫苗，更具體地說，本發明涉及一種含有大鼠細胞色素P450家族26超家族A多肽1(Cyp26a1)的抗腫瘤基因疫苗及其應用。

背景技術

我國現有癌癥病人300多萬人，每年死于惡性腫瘤的患者約為130萬人。每年有160萬到200萬新發的惡性腫瘤病例，每年死于癌癥的患者約為130萬，并以3％的速度遞增，給我國人民的生活和健康造成巨大威脅，給社會和家庭帶來巨大的壓力，一定程度上制約了我國經濟的可持續發展。乳腺癌是一種嚴重危害人類，尤其是女性健康的惡性腫瘤。乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤，位列十大高發性腫瘤，大約每100名婦女中就有一人患乳腺癌。雖然男性患乳腺癌的幾率比女性少100倍，但是由于檢查的忽視，男性乳腺癌患者的致死率較高。在美國，2003年有212,600名婦女經檢查患乳腺癌，40,200名婦女死于該疾病。更讓人關注和擔心的是，到確診之時，已經有40％的患者發生了轉移。乳腺癌有幾種不同的組織學類型，其中絕大多數(90％左右)起源于乳腺導管，最常見的乳腺癌是浸潤性導管癌；大約5％的乳腺癌發生在乳腺小葉，稱為乳腺小葉癌。此外，乳腺癌患者復發的幾率也高于一般人群。乳腺癌的治療包括手術治療、放射治療、化學治療、生物治療等，盡管科研工作者對攻克乳腺癌的研究投放了大量的精力，但是一旦發生轉移和侵潤，乳腺癌的治療仍然顯得非常的棘手。

上世紀九十年代初，一系列關于注射外源基因在體內誘導免疫應答的報道揭開了DNA疫苗研究的序幕，從此基因免疫的新技術引起世界各國的高度重視。由于基因免疫可誘導機體產生全面的免疫應答，同時又具有安全、可靠、生產方便等優點，故1994年世界衛生組織(WHO)撥款把DNA疫苗納入WHO全球免疫研制開發計劃之中。1994年美國國家衛生?研究院(NIH)以國家生物戰略發展計劃的專項經費資助開展DNA疫苗治療HIV的研究工作，1995年報導了世界第一例DNA疫苗治療艾滋病的臨床試驗，1998-2007年相繼報導了DNA疫苗治療艾滋病的二期臨床試驗及臨床應用報道。實驗證明，DNA疫苗由于其編碼的抗原可以通過外源和內源兩種途徑被抗原提呈細胞提呈，所以能激起全面的免疫反應。DNA疫苗技術的核心就是把外源基因組裝到含有必要表達調控元件的真核質粒表達載體上，然后將重組的質粒導入動物體內，使外源基因在體內表達，從而激活機體的免疫系統，引發免疫反應。與傳統的疫苗相比，DNA疫苗有很多優勢，如疫苗相對穩定，方便生產、運輸和保存且便宜；可設計性強；檢測、檢驗方便。實驗證明，DNA疫苗由于其編碼的抗原可以通過外源和內源兩種途徑被抗原提呈細胞提呈，所以能激起全面的免疫反應。因此，DNA疫苗技術很快被運用在肝炎、愛滋病、結核病等感染性疾病的防治研究上。近幾年DNA疫苗被運用在腫瘤的防治研究上，取得了較大的進展，部分腫瘤DNA疫苗已經進入臨床試驗階段。根據腫瘤相關抗原(Tumor?Associated?Antigens：TAAs)研制的全長基因疫苗可以打破機體免疫耐受，通過MHC-I和MHC-II型抗原提呈途徑，引起B細胞反應和CD4+、CD8+T細胞反應。從而有效的保護機體免受腫瘤的侵襲。有研究者通過構建不同種生物間同源DNA疫苗的方法，為腫瘤基因疫苗的研制開辟了一條新的思路。TAAs全長DNA疫苗一個潛在的不利因素就是TAAs體內表達產生的生物學作用。如一些TAAs本身就是癌基因產物，它們在癌變過程中可能起到信號分子的作用(Fong?et?al.，2001；Pupa?et?al.，2005)。Zhu等(Zhu?et?al.，2001)用破傷風毒素無毒性的C片段(Frc)作為佐劑，融合SvFv，構建Id?DNA疫苗，結果發現該疫苗不僅對該Id陽性腫瘤有作用，對陰性腫瘤一樣有效。上皮癌相關的抗原MUC?1是一種高度糖基化的黏液素，不少分泌腺來源的上皮細胞癌化與細胞過量分泌MUC1相關。免疫實驗表明MUC1基因疫苗對于前列腺和乳腺癌的患者有一定的治療效果，進一步的二期臨床正在評價中(Stevenson?et?al.，2004)。20％到30％的乳腺癌和卵巢癌病人的癌細胞中過量表達生長素受體的賴氨酸激酶HER2(neu，c-erbB-1)，小鼠腫瘤模型實驗證明MMTV-HER2基因疫苗可以在體激發CTL反應和抗體，進一步的免疫細胞缺失實驗表明僅僅是疫苗誘導的抗體反應本身就能夠有效的治療腫瘤(Renard?et?al.，2003)。