[發明專利]復合檢測禽流感和新城疫病毒的試劑盒及檢驗方法有效
| 申請號： | 201010128875.1 | 申請日： | 2010-03-18 |
| 公開（公告）號： | CN101798602A | 公開（公告）日： | 2010-08-11 |
| 發明（設計）人： | 孫濤;徐彪;朱來華;凌宗帥;肖西至;鄧明俊;張太翔;文峰 | 申請（專利權）人： | 山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201 | 代理人： | 張中南 |
| 地址： | 266002 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 復合 檢測 禽流感 新城 疫病 試劑盒 檢驗 方法 | ||
1.復合檢測禽流感和新城疫病毒的試劑盒，其特征在于該試劑盒包括以下組分：
1)裂解液：100％Trizol；
2)RT-PCR反應液：內含濃度為25mmol/L?MgCl2，10mmol/L?dNTP?Mixture；
3)引物及探針混合液；檢測禽流感病毒上下游引物和檢測新城疫病毒上下游引物按終 濃度為20pmol/L等比例混合，檢測禽流感病毒探針和新城疫病毒探針按終濃度為 10pmol/L等比例混合；
其中所涉及的檢測H5、H7和H9亞型禽流感病毒的引物及探針序列為：
禽流感病毒上游引物：5’-CGGACGAAAAGGCAACGA-3’；
禽流感病毒下游引物：5’-CATTGTCTCCGAAGAAATAAGATCCT-3’；
禽流感病毒探針：JOE-CGATCGTGCCCTCCTTTGACATGAGT-TAMRA；
檢測新城疫病毒中強毒的引物及探針序列為：
新城疫病毒上游引物：5’-TGCTCACTCCTCTTGGYGAT-3’
新城疫病毒下游引物：5’-TGCTGTTAYCTGTGCCGCHG-3’
新城疫病毒探針FAM-CACCTATAAAGCGTTTYTGTCTCCTTCCTCC-TAMRA
其中Y代表嘧啶，此處為T或C，H代表嘌呤和嘧啶，此處為A或C或T；
4)酶混合物：濃度均為5U/μL的AMV反轉錄酶與Taq酶按1；1比例混勻分裝；
5)DEPC水：內含濃度為1‰的焦炭酸二乙酯；
6)陰性對照：滅活尿囊液，采自孵育至9日齡的SPF雞胚，無菌抽取其雞胚尿囊液， 60℃作用1小時滅活制備；
7)陽性對照：利用AIV?NP基因保守區和NDV?F基因裂解位點區構建的cDNA質粒。
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