[發(fā)明專利]玉米降血壓肽的分離純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010128730.1
• 申請日: 2010-03-22
• 公開（公告）號: CN101798587A
• 公開（公告）日: 2010-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹龍奎;刁靜靜
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/16
• 代理公司: 哈爾濱東方專利事務(wù)所 23118
• 代理人: 曹愛華

一、技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及的是從玉米蛋白粉中分離玉米肽的方法，具體涉及的是玉米降 血壓肽的分離純化方法。

二、背景技術(shù)：

玉米蛋白粉是玉米淀粉生產(chǎn)中的主要副產(chǎn)品，含有大約60％的蛋白質(zhì)，主 要為玉米醇溶蛋白(68％)、谷蛋白(22％)和球蛋白(1.2％)。由于玉米蛋白粉組成 復(fù)雜，水溶性差，賴氨酸和色氨酸含量很低，限制了它在食品工業(yè)中的應(yīng)用， 并且由于其價格低廉，當(dāng)今在國內(nèi)主要將玉米蛋白粉用于飼料工業(yè)，這樣浪費(fèi) 了寶貴的蛋白資源。通過酶法有限水解不僅可以提高玉米蛋白的水溶性，便于 利用我國有限的蛋白質(zhì)資源，而且通過進(jìn)一步分離純化水解產(chǎn)物得到具有抗氧 化、降血壓、抗疲勞、醒酒等功能特性。

玉米活性肽來自于玉米蛋白的水解產(chǎn)物，是由分子量很小(一般集中在1000 以下)，但活性很高的短肽組成的混合低聚肽。小分子肽比等量氨基酸具有更高 的生物活性和營養(yǎng)價值，而且易于吸收，為此，玉米活性肽的開發(fā)具有廣泛的 應(yīng)用前景。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(Angiotensin?I-Converting?Enzyme，簡稱ACE) 在腎-血管緊張素系統(tǒng)中對調(diào)節(jié)血壓具有重要的生理功能。由于體內(nèi)ACE活性太 高而引起的高血壓，可以通過抑制ACE活性，阻止血管緊張素的生成和激肽降 解的減少達(dá)到治療高血壓的作用。因此ACE抑制劑可作為降血壓的藥物，玉米 蛋白含有高比例的纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸等，很少含有 賴氨酸等堿性氨基酸，這種獨(dú)特的氨基酸組成使玉米醇溶蛋白的水溶性差、營 養(yǎng)價值不高，但是這種不平衡的氨基酸組成使玉米蛋白成為降血壓肽的來源。 其中α-玉米醇溶蛋白和γ-玉米醇溶蛋白的水解產(chǎn)物就具有較為顯著的降血壓 作用。所以將玉米蛋白粉進(jìn)行水解，可將水溶性差的醇溶蛋白水解成具有較好 溶解性、高降血壓活性的玉米肽，并將其用于醫(yī)藥、食品領(lǐng)域，發(fā)揮其藥食同 源的作用。

我國是高血壓病高發(fā)的國家，根據(jù)衛(wèi)生部發(fā)布的調(diào)查報告顯示，我國18歲 及以上居民高血壓患病率為18.8％，而目前他們所服用的傳統(tǒng)合成的降血壓藥物 約有200多種，需終生服用，且具有副作用，因此從天然產(chǎn)物中提取降血壓功 效成分為新藥研制和功能食品開發(fā)是研究的熱點(diǎn)，我國對降血壓肽的研究剛剛 起步，但已經(jīng)引起人們的重視，“十五”期間生物醫(yī)藥研究的重點(diǎn)方向之一就是 多肽藥物。本產(chǎn)品具有降血壓活性，而且屬于藥食同源性的產(chǎn)品，食用安全性 高，而且降血壓肽對血壓正常者無降壓作用。

但是由于從各種蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)物中提取的降血壓肽的氨基酸組成和結(jié)構(gòu)差 別很大，沒有一個固定的氨基酸組成，而且酶解產(chǎn)物成分也非常復(fù)雜，因此分 離純化高活性的玉米肽相當(dāng)困難。目前對于肽類物質(zhì)分離提純常用的方法包括： 離子交換層析、凝膠過濾層析、凝膠電泳、高效液相色譜、毛細(xì)管電泳等。而 在工業(yè)化中則應(yīng)用具有分子篩功能的膜分離技術(shù)，但分離膜抗污染能力差，膜 通量衰減嚴(yán)重，而且分離過程中對操作參數(shù)的控制隨意性太大，利用膜分離手 段分離后的肽多是一種分子量范圍較廣的產(chǎn)物，活性和純度相對比較低，影響 產(chǎn)品的質(zhì)量等。

為此，本發(fā)明在前人研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探尋高效、先進(jìn)的提取分離純 化技術(shù)，使玉米蛋白水解物更精確在一定的范圍內(nèi)得到分離，提高玉米蛋白肽 的降血壓活性。

三、發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的一個目的是提供一種玉米降血壓肽的分離純化方法，用于解決傳 統(tǒng)分離玉米肽的方法分離高活性玉米降血壓肽時純度低和活性低的問題。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：這種玉米降血壓肽的分離純 化方法是將去掉玉米黃色素的玉米蛋白粉用堿性蛋白酶進(jìn)行水解，得到降血壓 肽粗品；對降血壓肽粗品采用板框過濾器進(jìn)行過濾去掉雜質(zhì)，再經(jīng)膜進(jìn)行過濾， 然后通過高效液相色譜分析確定目標(biāo)產(chǎn)物分子量，選取出具有降血壓活性的水 解產(chǎn)物，該水解產(chǎn)物的分子量773；對具有降血壓活性的水解產(chǎn)物采用模擬移動 床色譜分離系統(tǒng)進(jìn)行分離純化，得到玉米降血壓肽，分離純化是采用等度洗脫 的方式進(jìn)行，其中進(jìn)料流速為5ml/min～100ml/min；流動相流速為 6.5ml/min～130ml/min，流動相濃度為40％乙醇；產(chǎn)品出口流速為 4.5ml/min～90ml/min；循環(huán)泵流速為10ml/min～200ml/min，切換時間6min～120 min。

上述方案中的堿性蛋白酶為底物的1％，pH9.0，水解溫度50℃，水解度為 8.4％。

上述方案中的板框過濾器選用300目的濾布。