[發明專利]一種制備粉擬青霉素的方法及其專用菌株

無效

• 申請號: 201010125063.1
• 申請日: 2010-03-12
• 公開（公告）號: CN101864367A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 車永勝;劉杏忠;鄒先偉;孫炳達;劉述春
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/10;A61K31/4015;A61P31/04;A61P31/10;C12R1/79
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.粉擬青霉(Paecilomyces?farinosus)6.48，其保藏編號為CGMCC?No.3627。

2.一種制備粉擬青霉素的方法，包括如下步驟：發酵粉擬青霉(Paecilomycesfarinosus)6.48CGMCC?No.3627，得到含有粉擬青霉素的發酵液，從所述含有粉擬青霉素的發酵液中提取純化得到粉擬青霉素；

所述粉擬青霉素的化學式如式I所示：

(式I)。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述發酵中使用的培養基由葡萄糖、可溶性淀粉、大豆粉、玉米粉、酵母提取物、CaCO₃和水組成；葡萄糖在培養基中的濃度為5g/L，可溶性淀粉在培養基中的濃度為30g/L，大豆粉在培養基中的濃度為30g/L，玉米粉在培養基中的濃度為5g/L，酵母提取物在培養基中的濃度為5g/L，CaCO₃在培養基中的濃度為3g/L；所述培養基的pH值為6.5；

和/或，

所述發酵的條件為：溫度為25℃，轉速為150rpm，旋轉半徑為12mm，時間為30天，。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述發酵后，包括如下提取步驟：用不溶于水的且在25℃是液態的有機溶劑對所述含有粉擬青霉素的發酵液進行萃取，取有機相；

所述不溶于水的且在25℃是液態的有機溶劑為氯仿、乙酸乙酯、苯、甲苯、二甲苯或乙酸乙酯。

5.根據權利要求2、3或4所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述提取后，包括用硅膠柱分離純化的步驟；所述用硅膠柱分離純化包括如下洗脫步驟：先用300ml石油醚體積∶丙酮體積為25∶1的石油醚和丙酮的混合溶液作為流動相進行洗脫，再用300ml石油醚體積∶丙酮體積為20∶1的石油醚和丙酮的混合溶液作為流動相進行洗脫，再用300ml石油醚體積∶丙酮體積為15∶1的石油醚和丙酮的混合溶液作為流動相進行洗脫，再用300ml石油醚體積∶丙酮體積為10∶1的石油醚和丙酮的混合溶液作為流動相進行洗脫，再用360ml石油醚體積∶丙酮體積為5∶1的石油醚和丙酮的混合溶液作為流動相進行洗脫，再用400ml石油醚體積∶丙酮體積為3∶1的石油醚和丙酮的混合溶液作為流動相進行洗脫，再用400ml石油醚體積∶丙酮體積為1∶1的石油醚和丙酮的混合溶液作為流動相進行洗脫，收集所述用400ml石油醚體積∶丙酮體積為1∶1的石油醚和丙酮的混合溶液作為流動相洗脫下來的溶液；

和/或，所述用硅膠柱分離純化中，所用的填料為200-300目的硅膠；

和/或，所述硅膠柱的大小為高30cm和直徑3cm；

和/或，每個所述硅膠柱中裝40g硅膠。

6.根據權利要求2-5中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述用硅膠柱分離純化后，包括用凝膠色譜柱分離純化的步驟；所述用凝膠色譜柱分離純化包括如下洗脫步驟：用50ml甲醇進行第1次洗脫，用50ml甲醇進行第2次洗脫，收集第2次洗脫下來的溶液；

和/或，所述用凝膠色譜柱分離純化中，所用的填料為葡聚糖凝膠Sephadex?LH-20；

和/或，所述凝膠色譜柱的大小為高50cm和直徑1.5cm；

和/或，每個所述凝膠色譜柱中裝20g所述葡聚糖凝膠Sephadex?LH-20。

7.根據權利要求2-6中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述用凝膠色譜柱分離純化后，包括高效液相色譜分離的步驟；所述高效液相色譜分離中，填充介質為C18鍵合硅膠，流動相為甲醇和水的混合溶液，以甲醇與水的體積比為85∶15的混合溶液為起始液，以甲醇為終止液，進行線性梯度洗脫，線性梯度洗脫時間為25min，收集保留時間為14.8min的洗脫峰。

8.根據權利要求2-7中任一所述的方法，其特征在于：所述用硅膠柱分離純化中，是將所述含有粉擬青霉素的發酵液或所述有機相進行分離純化；

所述用凝膠色譜柱分離純化中，是將所述含有粉擬青霉素的發酵液、所述有機相或所述用石油醚體積∶丙酮體積為1∶1的石油醚和丙酮的混合溶液洗脫下來的溶液進行分離純化；

所述高效液相色譜分離中，是將所述含有粉擬青霉素的發酵液、所述有機相、所述用石油醚體積∶丙酮體積為1∶1的石油醚和丙酮的混合溶液洗脫下來的溶液或所述第2次洗脫下來的溶液進行分離。