[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)含有基因CryIAc的轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品的基因芯片及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010123691.6
• 申請(qǐng)日: 2010-03-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101838693A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 路興波;武海斌;孫紅煒;李凡
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)含有基因CryIAc的轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品的基因芯片及其應(yīng)用，屬于生物芯片技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

近年來(lái)，玉米、大豆、棉花、油菜和番茄等轉(zhuǎn)基因作物已在很多國(guó)家獲得批準(zhǔn)種植和生產(chǎn)，有的被加工成食品、飼料或用做食物添加劑。由于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的生態(tài)安全和食用安全一直備受爭(zhēng)議，40多個(gè)國(guó)家和地區(qū)相繼實(shí)施轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識(shí)制度。

各國(guó)轉(zhuǎn)基因標(biāo)識(shí)制度的相繼建立，對(duì)轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)的靈敏度和準(zhǔn)確性提出了嚴(yán)格的要求，各種轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)也成為研究熱點(diǎn)。常用的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)方法有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法，外源蛋白檢測(cè)法，基因芯片檢測(cè)技術(shù)。雖然國(guó)外對(duì)轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)方法研究已有十幾年，但由于轉(zhuǎn)基因作物的種類(lèi)多、數(shù)量大，一些轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品經(jīng)過(guò)深加工、各種條件處理與保存后，轉(zhuǎn)基因成分部分或完全降解，所以檢測(cè)難度大。因此，需要根據(jù)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展不斷更新檢測(cè)方法。

但不容樂(lè)觀的是，設(shè)計(jì)PCR反應(yīng)引物是一個(gè)棘手的問(wèn)題，必須確保反應(yīng)中兩條引物有相近的熔接溫度，引物之間不會(huì)發(fā)生相互作用，另外還要注意非特異性擴(kuò)增，特別是當(dāng)非特異性擴(kuò)增帶與目的帶相近時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性問(wèn)題，從而干擾結(jié)果的判斷。隨著GMO檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展情況及研究趨勢(shì)，基因芯片技術(shù)在此展示了更大的優(yōu)勢(shì)。基因芯片檢測(cè)原理是利用帶有熒光標(biāo)記的樣品同探針特異雜交，從而產(chǎn)生陽(yáng)性信號(hào)。因而非目的帶的擴(kuò)增只要不產(chǎn)生陽(yáng)性信號(hào)，就不會(huì)干擾，而且芯片檢測(cè)不依據(jù)電泳條帶。并且基因芯片可根據(jù)任何已知基因組序列設(shè)計(jì)特異性探針，以人工合成的方法快速制備芯片，且高度并行性、高通量、微型化、自動(dòng)化、高準(zhǔn)確度和靈敏度等優(yōu)點(diǎn)具有廣泛的應(yīng)用前景。

經(jīng)對(duì)現(xiàn)有專(zhuān)利和其他文獻(xiàn)的檢索，尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)于CryIAc基因的基因芯片檢測(cè)技術(shù)的專(zhuān)利報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足和實(shí)際檢測(cè)的需要，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)含有基因CryIAc的轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品的基因芯片及其應(yīng)用。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種檢測(cè)含有基因CryIAc的轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品的基因芯片，包括表面醛基化修飾的載玻片和陣列涂布于其上的探針以及核酸固定的陽(yáng)性對(duì)照(HEX)、雜交陽(yáng)性對(duì)照(PC)、陽(yáng)性質(zhì)控探針(18S?rRNA)、陰性質(zhì)控探針、空白對(duì)照；

其中，所述陽(yáng)性對(duì)照和雜交陽(yáng)性對(duì)照均為北京博奧生物技術(shù)有限公司的產(chǎn)品，晶核酸固定陽(yáng)性對(duì)照(HEX)產(chǎn)品號(hào)為：502000，晶雜交陽(yáng)性對(duì)照(PC)產(chǎn)品號(hào)為：503000。

所述陽(yáng)性質(zhì)控探針為18S?rRNA，其探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-

ATGGTGGTGACGGGTGACGGAGAATTAGGGTTCGATTCCG；

所述陰性質(zhì)控探針為SHDC-人類(lèi)表達(dá)特異蛋白基因，其探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-

ATTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCC；

所述陽(yáng)性質(zhì)控探針和陰性質(zhì)控探針序列均來(lái)源于許小丹，文思遠(yuǎn)等(檢測(cè)及鑒定轉(zhuǎn)基因大豆寡核苷酸芯片的制備.農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2005，13(4)：429-434)的報(bào)道；

所述空白對(duì)照為點(diǎn)樣液為雙蒸水；

所述的基因特CryIAc的探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-

TCAGAGAGTGGGGAAGCCGATCCTACTAACCCAGCTCTCCG。

所述芯片的陣列布局為人為規(guī)定，可以任意布局，比如圖1所示的布局。

所述載玻片上還可以涂布有探針對(duì)照，探針對(duì)照包括轉(zhuǎn)基因玉米Bt176轉(zhuǎn)化體特異性探針、轉(zhuǎn)基因玉米Bt11轉(zhuǎn)化體特異性探針、轉(zhuǎn)基因玉米TC1507轉(zhuǎn)化體特異性探針、轉(zhuǎn)基因玉米Mon810轉(zhuǎn)化體特異性探針和轉(zhuǎn)基因玉米GA21轉(zhuǎn)化體特異性探針。

所述轉(zhuǎn)基因玉米Bt176轉(zhuǎn)化體特異性探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-

TGCCCGTCACCGAGATCTGATGTTCTCTCCTCCATTGATG。

所述轉(zhuǎn)基因玉米Bt11轉(zhuǎn)化體特異性探針的序列為：