[發(fā)明專利]測定銀杏葉或其相關(guān)制劑中山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷含量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010122667.0
• 申請日: 2010-03-11
• 公開（公告）號: CN101788540A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王京輝;陳有根;付欣彤;王志斌;郭洪祝
• 申請（專利權(quán)）人: 北京市藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種測定銀杏葉或其相關(guān)制劑中山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷含量的方 法，包括如下步驟：

以山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷為對照品，利用高效液相色譜對作為供試品 的所述銀杏葉或其相關(guān)制劑中的山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷進(jìn)行測定，由外標(biāo) 法計算得到所述銀杏葉或其相關(guān)制劑中山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的含量；

在所述測定之前，先將所述對照品和所述供試品分別溶于溶劑中，分別得到對照 品溶液和供試品溶液；溶解所述對照品的溶劑選自甲醇、甲醇的水溶液、乙醇、乙醇 的水溶液和流動相中的任意一種；溶解所述供試品的溶劑選自甲醇、甲醇的水溶液、 乙醇、乙醇的水溶液和流動相中的任意一種；

所述相關(guān)制劑為銀杏葉藥材、銀杏葉提取物、含有銀杏葉的固體制劑或含有銀杏 葉的液體制劑；

所述測定銀杏葉或其相關(guān)制劑中山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷含量的方法， 是按照下述方法a-方法c中的任一方法進(jìn)行測定的：

所述方法a為：

1)制備對照品的溶液：稱取山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷對照品，加甲醇 制成每1ml含0.07mg的溶液，得到所述對照品的溶液；

2)制備供試品溶液：

(1)制備銀杏葉的溶液：取銀杏葉，粉碎，稱取2g，加入質(zhì)量百分濃度為75％ 的乙醇水溶液100ml，稱定重量，置于水浴中加熱回流提取40分鐘，取出，放冷，再 稱定重量，用質(zhì)量百分濃度為75％的乙醇水溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，量取 續(xù)濾液25ml，蒸干，殘渣加水2ml使其溶解，置于已處理好的聚酰胺柱中，用水50ml 洗脫，棄去水液，再用質(zhì)量百分濃度為75％的乙醇水溶液100ml洗脫，收集洗脫液， 蒸干，殘渣加甲醇使其溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用 0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，得到所述銀杏葉的溶液；其中，所述聚酰胺柱按 照下述方法進(jìn)行處理：取聚酰胺顆粒用60目篩篩除細(xì)粉，加2～3倍重量的水浸泡使其 潤濕，裝入色譜柱中，用2～5倍柱體積的質(zhì)量百分濃度為2％～5％的鹽酸水溶液洗脫， 再用去離子水洗脫至中性，接著用2～5倍柱體積的質(zhì)量百分濃度為2％～5％的鹽酸水溶 液洗脫，再用去離子水洗脫至中性；

(2)制備銀杏葉提取物的溶液：稱取購自浙江康恩貝植物提取物有限公司生產(chǎn) 的產(chǎn)品批號為070301的銀杏葉提取物0.035g，加入甲醇10ml，超聲處理10分鐘，用 孔徑為0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，得到所述銀杏葉提取物的溶液；

(3)制備舒血寧注射液的溶液：用孔徑為0.45μm的微孔濾膜濾過舒血寧注射液， 取續(xù)濾液，得到所述舒血寧注射液的溶液；

3)測定所述供試品溶液中山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的含量：

選用型號為Agilent?ZORBAX?Eclipse?Plus?C18、規(guī)格為50mm×4.6mm、填充劑粒 徑為1.8μm的高效液相色譜柱，所述色譜柱中的填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，以 乙腈和質(zhì)量百分濃度為0.4％的磷酸水溶液組成的混合液為流動相，分別精密吸取所述 對照品溶液與所述供試品溶液各2μl，分別注入高效液相色譜儀中，按照表1所示進(jìn) 行梯度洗脫，每次所述梯度洗脫的平衡時間為10分鐘，所述流動相的流速為每分鐘 0.6ml，檢測波長為360nm，所述色譜柱的柱溫為40℃，理論板數(shù)按山柰酚對香豆酰 基葡萄糖鼠李糖苷峰計算不低于8000，所述表1中，A代表乙腈，B代表質(zhì)量百分濃 度為0.4％的磷酸水溶液，％代表體積百分比；

表1、梯度洗脫條件

根據(jù)所得所述供試品和對照品的高效液相色譜圖計算得到所述山柰酚對香豆酰 基葡萄糖鼠李糖苷的峰面積及所述對照品的峰面積，按照下式所示的外標(biāo)法進(jìn)行計算：

得到所述供試品溶液中山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的濃度；

所述方法b為：

1)制備對照品的溶液：稱取山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷對照品，加甲醇 制成每1ml含0.07mg的溶液，得到所述對照品的溶液；

2)制備供試品溶液：

(1)制備銀杏葉的溶液：取銀杏葉，粉碎，稱取2g，加入質(zhì)量百分濃度為75％ 的乙醇水溶液100ml，稱定重量，置于水浴中加熱回流提取40分鐘，取出，放冷，再 稱定重量，用質(zhì)量百分濃度為75％的乙醇水溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，量取 續(xù)濾液25ml，蒸干，殘渣加水2ml使溶解，置于已處理好的聚酰胺柱中，用水50ml 洗脫，棄去水液，再用質(zhì)量百分濃度為75％的乙醇水溶液100ml洗脫，收集洗脫液， 蒸干，殘渣加甲醇使其溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用 0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，得到所述銀杏葉的溶液；其中，所述聚酰胺柱按 照下述方法進(jìn)行處理：取聚酰胺顆粒用60目篩篩除細(xì)粉，加2～3倍重量的水浸泡使其 潤濕，裝入色譜柱中，用2～5倍柱體積的質(zhì)量百分濃度為2％～5％的鹽酸水溶液洗脫， 再用去離子水洗脫至中性，接著用2～5倍柱體積的質(zhì)量百分濃度為2％～5％的鹽酸水溶 液洗脫，再用去離子水洗脫至中性；

(2)制備銀杏葉提取物的溶液：稱取購自浙江康恩貝植物提取物有限公司生產(chǎn) 的產(chǎn)品批號為070301的銀杏葉提取物0.035g，加入甲醇10ml，超聲處理10分鐘，用 孔徑為0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，得到所述銀杏葉提取物的溶液；

(3)制備舒血寧注射液的溶液：用孔徑為0.45μm微孔濾膜濾過舒血寧注射液， 取續(xù)濾液，得到所述舒血寧注射液的溶液；

3)測定所述供試品溶液中山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的含量：

選用型號為HP?1100型Inertsil^R?ODS-3C18、規(guī)格為250mm×4.6mm、填充劑粒 徑為5μm的高效液相色譜柱，所述色譜柱中的填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，以流 動相A和流動相B組成的混合液為流動相，分別吸取所述對照品溶液與所述供試品溶 液各10μl，分別注入高效液相色譜儀中，按照表2所示進(jìn)行梯度洗脫，每次洗脫的平 衡時間為10分鐘，流動相的流速為每分鐘1.0ml，檢測波長為360nm，所述色譜柱的 柱溫為30℃，理論板數(shù)按山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷峰計算不低于8000；所述 流動相A為由水、乙腈、異丙醇和檸檬酸以體積比1000∶470∶50∶6.08混合而得的 混合液，所述流動相B為水、乙腈、異丙醇和檸檬酸以體積比1400∶200∶30∶6.88 混合而得的混合液；所述表2中，A代表所述流動相A，B代表所述流動相B，％代 表體積百分比；

表2、梯度洗脫條件

根據(jù)所得所述供試品和對照品的高效液相色譜圖計算得到所述山柰酚對香豆酰 基葡萄糖鼠李糖苷的峰面積及所述對照品的峰面積，按照下式所示的外標(biāo)法進(jìn)行計算：

得到所述供試品溶液中山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的濃度；

所述方法c為：

1)制備對照品的溶液：稱取山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷對照品適量，加 甲醇制成每1ml含0.07mg的溶液，得到所述對照品的溶液；

2)制備供試品溶液：

(1)制備銀杏葉提取物的溶液：稱取購自浙江康恩貝植物提取物有限公司生產(chǎn) 的產(chǎn)品批號為070301的銀杏葉提取物0.035g，加入甲醇10ml，超聲處理10分鐘，用 孔徑為0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，得到所述銀杏葉提取物的溶液；

(2)制備舒血寧注射液的溶液：用孔徑為0.45μm微孔濾膜濾過舒血寧注射液， 取續(xù)濾液，得到所述舒血寧注射液的溶液；

3)測定所述供試品溶液中山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的含量：

選用型號為Inertsil?ODS-3?C18、規(guī)格為250mm×4.6mm、填充劑粒徑為5μm的高 效液相色譜柱，所述色譜柱中的填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，以乙腈和質(zhì)量百分 濃度為0.4％的磷酸水溶液組成的混合液為流動相，分別吸取所述對照品溶液與所述供 試品溶液各10μl，分別注入高效液相色譜儀中，按照表3所示進(jìn)行梯度洗脫，每次洗 脫的平衡時間為10分鐘，流動相的流速為每分鐘1.0ml，檢測波長為360nm，所述色 譜柱的柱溫為30℃，理論板數(shù)按山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷峰計算不低于 8000；所述表3中，A代表乙腈，B代表質(zhì)量百分濃度為0.4％的磷酸水溶液，％代表 體積百分比；

表3、梯度洗脫條件

所得所述供試品和對照品的高效液相色譜圖計算得到所述山柰酚對香豆酰基葡 萄糖鼠李糖苷的峰面積及所述對照品的峰面積，按照下式所示的外標(biāo)法進(jìn)行計算：

得到所述供試品溶液中山柰酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的濃度。