[發明專利]基于端粒酶顯像的腫瘤診斷試劑盒

無效

• 申請號: 201010121477.7
• 申請日: 2010-03-11
• 公開（公告）號: CN102188725A
• 公開（公告）日: 2011-09-21
• 發明（設計）人: 張舒羽;吳錦昌;周俊東
• 申請（專利權）人: 蘇州百潤生物科技有限公司
• 主分類號: A61K51/08
• 分類號: A61K51/08;A61K103/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：本發明生物試劑技術領域，具體是以采用放射性標記的端粒抑素來對腫瘤進行?像，從而進行腫瘤的早期診斷。

技術背景：

腫瘤的早期發現，早期治療，可降低篩查人群癌癥死亡率，改善預后，提高生活質量，減少放化療藥物的使用率，降低治療費用。然而腫瘤的早期診斷一直是一個沒有攻克的難題，因而發現合適的腫瘤標志和合理選擇與應用腫瘤標志達到篩查和早期診斷目的，是當前的首要任務。

常用的篩查方法有子宮頸癌的巴氏涂片，結直腸癌的隱血試驗，前列腺癌的肛指檢查?食道癌的拉網等，但這些檢查均不理想。計算機斷層掃描、超聲診斷、乳房攝影等檢測的?小極限為1cm(109細胞)直徑的腫瘤。從理論上講，腫瘤標志較敏感，當腫瘤當細胞數達到108時，就可采用免疫法、多重聚合酶鏈反應、芯片等技術檢測到蛋白、酶、癌基因等生化變化。臨床證實，甲胎蛋白陽性比物理檢查早出現9個月。而腫瘤標有須定位、可以定量、無創、能動態監測、易普及和推廣等優點，可作為首選的初篩方法。

端粒是真核細胞染色體末端的特殊DNA-蛋白質結構，其DNA的特殊是含有大量的(TTAGGG)n串聯重復并富含G的重復序列，這些序列在進化中高度保守。端粒結構功能主要有2個：一是可保護染色體基因組免受被降解或有害重組，其二是端粒重復可為染色體末端提供一種可消耗的非編碼序列以暫時緩沖或取消末端復制問題所帶來的染色體DNA進行性縮短。大多數普通體細胞的端粒會隨周期性復制而逐漸縮短，最終達到一個使染色體完整性喪失的臨界點，細胞增殖停止。說明端粒的縮短與高等真核生物中正常體細胞增生受到限制相關，在細胞衰老中扮演“分裂鐘”的作用。

與體細胞不同，生殖細胞要為將來產生新的有機體而保存基因組的全部信息。為此它們必須解決端粒縮短所引起的不良后果，方法是在染色體末端補充新的端粒重復序列。端粒酶就是行使這種功能的DNA聚合酶，它是由RNA、蛋白質構成的核酸蛋白，可在體內以酶結構中的RNA成份(與端粒重復序列互補)為模板，在染色體末端催化添加TTAGGG重復序列。在生殖細胞中由于有端粒酶表達，其端粒不隨年齡增長而縮短，故生殖細胞為永生細胞。

由于端粒縮短和端粒酶無活性，體細胞通常逐漸衰老死亡。僅有極少數細胞偶然通過激活端粒酶而逃避程序性老化，其生存延長可能給另外的基因損傷的積累提供機會，導致進行性腫瘤性發展[2]。在大多數癌細胞系和腫瘤細胞中端粒酶均有高水平表達[3]。表明端粒酶的激活表達與細胞的無限增殖有密切關系，通過解除細胞衰老過程中的增生受限，端粒酶的?新活化可能是體細胞向腫瘤轉化的關鍵步驟。

一些正常需要更新的組織表達低水平的端粒酶，其作用僅是部分補償末端復制問題造成的端粒進行性縮短。已發現有端粒酶表達的正常組織有外周血淋巴細胞、造血干細胞、生殖細胞、胚胎體細胞、毛發、皮膚、子宮內膜等分裂旺盛的組織。正常外周血單個核細胞表達端粒酶的水平僅為無限增殖的癌細胞的1％～2％。Hiyama等發現正常的腸道粘膜有端粒酶活性，他認為這種酶表達起源于腸道基底干細胞，但其水平比癌性粘膜低10倍～100倍。盡管造血祖細胞和激活的淋巴細胞表達很強的端粒酶活性，但端粒仍然逐漸縮短，提示在這些細胞是以一種與端粒長度無關的方式上調酶活性。

由于組織樣品通常是不同類型細胞的混合物，其中可能含有表達端粒酶的正常細胞，如果不了解由正常細胞產生的背景表達水平，就有可能將正常細胞的表達誤判為腫瘤細胞的表達。

研究表明，大多數腫瘤組織細胞均有較高水平的端粒酶表達。而且在一些前侵襲性病變(如發育異常、原位癌)端粒酶表達的頻率很高，表明端粒酶激活是癌癥多步驟形成過程中的早期事件。常見惡性腫瘤端粒酶表達情形見附表。癌組織端粒酶表達有以下特點。

癌組織表達陽性率很高，除少數腫瘤外，陽性率均在80％以上。而癌旁組織和正常相應組織陽性率低于10％，為低水平表達。總體上，端粒酶表達與臨床特征無明顯關系，但與臨床病理學特征有一定聯系。一些研究表明端粒酶活性反映了細胞的惡變程度。例如SCLC的惡性程度高于NSCLC，故端粒酶的檢出率和活性均高于NSCLC[7]。胃癌中端粒酶陽性腫瘤惡性程度較高。前列腺癌組織中端粒酶活性相對水平與病理分化有關，高水平端粒酶活性在分化差的前列腺癌中更常見。

在一些前侵襲性病變中端粒酶表達水平增加，如結腸腫瘤、口腔原位癌和發育異常病灶約半數表現端粒酶活性，盡管前侵襲病變并非都進展為癌，但其中端粒酶表達陽性者似乎可列為密切監控的對象。