[發明專利]用于單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置

有效

• 申請號: 201010120345.2
• 申請日: 2010-03-09
• 公開（公告）號: CN101788527A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 沈超峰;張聰愷;陳蕾;曾躍春;施積炎;陳英旭
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 韓介梅

技術領域

本發明涉及單細胞凝膠電泳實驗裝置，適用于單細胞凝膠電泳實驗的樣品 制備及保存。

背景技術

單細胞凝膠電泳技術(single?cell?gel?electrophoresis，SCGE)，是一種80年代 末發展起來的在細胞水平上快速檢驗真核細胞DNA的損傷與修復的新技術。在 誘變劑的作用下，細胞的DNA受到損傷，將分離出的細胞與低熔點瓊脂糖混合， 鋪于載玻片上電泳，斷裂的DNA會在電場力的作用下從核內移出。熒光染料染 色后，在熒光顯微鏡下，可觀察到受損細胞核的彗星狀圖像——明亮的頭部為 細胞核與一系列的DNA斷片組成的彗尾，尾巴的長度和熒光強度與誘變劑導致 的DNA斷裂數成正比，未受損細胞只有不動的細胞核(彗核)而無彗尾。通過 對彗星圖像進行測量與分析即可判斷細胞DNA的損傷程度，廣泛應用于毒理學、 生物學、醫學、環境生物監測等領域。

單細胞凝膠電泳實驗的基本步驟包括：(1)制膠；(2)裂解；(3)解旋與 電泳；(4)中和洗滌；(5)熒光染色。制備好的玻片樣品即可利用熒光顯微鏡 拍照分析，從而對細胞DNA損傷程度進行進行評價。長期以來，單細胞凝膠電 泳樣品制備過程中制膠工藝比較復雜，對操作環境的避光要求高，操作不慎會 導致樣品DNA損傷；每批次處理樣品數量少且制得的膠體易在后續過程中脫落， 實驗效率低，平行性差；制備過程中有毒試劑使用量較大，成本高，同時對環 境存在污染；另外，制備后樣品保存環境要求較高，需避光、保濕條件，同時 要易于查找。以上幾點不足限制了單細胞凝膠電泳技術的進一步推廣應用。

發明內容

本發明的目的在于克服現有樣品制備過程中存在的不足，提供一種快速、 高效、操作簡單、集單細胞凝膠電泳實驗的樣品制備和保存于一體的單細胞凝 膠電泳試驗的成套裝置。

本發明的單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置，包括盒體、盒蓋，盒體中有網 格狀支架，支架的每個網格中放置玻璃載玻片，玻璃載玻片由水平底板、垂直 于底板的兩個側板和分別設在兩個側板上端平行于底板且向外延的平板構成， 盒蓋上設由與盒體中支架網格相對應的進樣孔，進樣孔封有供進樣槍頭穿透的 隔墊。

本發明的的成套裝置可用于單細胞凝膠電泳實驗中樣品制膠、細胞裂解、 解旋與電泳、中和洗滌以及熒光染色。使用方法如下：

(1)制膠：關閉盒蓋。將吸取有1％常熔點瓊脂糖凝膠的進樣槍頭穿透盒蓋 上隔墊，快速滴加在載玻片上，左右搖晃盒體，使常熔點瓊脂糖在載玻片上均 勻鋪開，放置于室溫下固化，得到鋪有第一層瓊脂糖凝膠的玻片；再將含有待 測細胞的培養液與0.7％低熔點瓊脂糖凝膠在37℃溫度下預熱并混勻，滴加在所 述鋪有第一層瓊脂糖凝膠的玻片上，左右搖晃盒體，使低熔點瓊脂糖在載玻片 上均勻鋪開，并置于4℃固化，得到鋪有兩層瓊脂糖凝膠的玻片。

(2)細胞裂解：載玻片上加入1mL?4℃細胞裂解液，浸沒瓊脂糖凝膠，60 分鐘后得到細胞裂解后的玻片。

(3)解旋與電泳：將細胞裂解后的載玻片連同支架一起從盒體中提出，用 電泳液沖洗，然后置于裝有預冷電泳液的電解槽中靜置20分鐘，再進行電泳。

(4)中和洗滌：將電泳后的載玻片連同支架一起放入盒體中，載玻片中加 入1mL?Tris緩沖液(0.4M，pH＝7.5)浸洗。浸洗完成后取出，蒸餾水反復沖洗后， 放回盒體，載玻片中加入1mL無水乙醇脫水。

(5)熒光染色：在載玻片中加入0.5mL?EB染料染色。

制備好后的單細胞凝膠電泳樣品放置于盒體中，蓋上盒蓋，密封、避光、 冷藏保存。

本發明有如下優點：

1、高效性：可同時對大量樣品進行處理，提高了樣品制備的效率。

2、穩定性：制得的瓊脂糖凝膠較薄，與載玻片貼合緊密，不易脫落，且瓊 脂糖凝膠中細胞分散均勻，樣品間平行性好。

3、避光性：樣品均置于盒體中避光制備，避免了紫外線對細胞的額外損傷。

4、經濟環保：使用本發明成套裝置可節約大量試劑，節省成本，減少有毒 試劑排放，降低對環境的危害。

5、樣品保存：本發明成套裝置集單細胞凝膠電泳實驗的樣品制備和保存于 一體，可有效保存制備后的樣品，避免保存過程中環境因素給樣品帶來損傷。

附圖說明

圖1是單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置縱向局部剖視圖；