[發明專利]系列鎮痛活性肽DKK及其類似物的獲得方法和應用

有效

• 申請號: 201010120159.9
• 申請日: 2010-03-09
• 公開（公告）號: CN101766808A
• 公開（公告）日: 2010-07-07
• 發明（設計）人: 張景海;宋永波;吳春福
• 申請（專利權）人: 沈陽藥科大學
• 主分類號: A61K38/17
• 分類號: A61K38/17;C07K14/435;C07K1/113;C12N15/74;C12N15/79;A61P29/00;A61P25/04
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 李宇彤

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，涉及系列鎮痛活性肽DKK及其類似物的獲 得方法和作為鎮痛藥物在醫藥領域中的應用，具體地說，本發明涉及系列鎮痛 活性肽DKK及其衍生物或類似物或活性片段結構及其獲得方法和作為鎮痛藥物 在醫藥領域中的應用。

背景技術

疼痛是人類共有而又有較大個體差異性的一種不愉快的主觀感覺，它在軀 體受到威脅時提供警報信號，是生命不可缺少的一種保護機制。專利名稱為蝎 抗神經興奮肽(發明專利號：ZL?00112016.6)的發明提供了一種蝎抗神經興奮 肽及其基因序列和作用為預防、治療神經興奮性疾病(如癲癇、驚厥等)的藥 物。Chun-Guang?Wang等在文章中報道了抗癲癇肽結構(Chun-Guang?Wang， Xiao-Lin?He，Feng?Shao，Wei?Liu，Min-Hua?Ling，Da-Cheng?Wang?and?Cheng-Wu Chi.Molecular?characterization?of?an?anti-epilepsy?peptide?from?the scorpion?Buthus?martensi?Karsch.Eur.J.Biochem.268，2480-2485，2001)。 上述專利和論文所涉及的多肽是否具有鎮痛生物活性并沒有報道，因此，有必 要針對其鎮痛生物活性進行系統研究。

發明內容

本發明的一個目的是利用基因工程技術表達系列鎮痛活性肽DKK，針對純化 的系列鎮痛活性肽DKK，進行其體內鎮痛生物活性研究。

本發明的第二個目的是在證明系列鎮痛活性肽DKK具有鎮痛生物活性的基 礎上，利用基因工程技術獲得系列鎮痛活性肽DKK的衍生物或類似物或活性片 段，所獲得的系列鎮痛活性肽DKK的衍生物或類似物或活性片段仍具有鎮痛生 物活性。

本發明的第三個目的是提供獲得系列鎮痛活性肽DKK及其衍生物或類似物 或活性片段的方法，該方法包括：

1.分別構建系列鎮痛活性肽DKK及其衍生物或類似物或活性片段所編碼DNA 的重組表達載體；

2.用步驟1的重組載體分別轉化適當的宿主細胞；

3.在適合于表達系列鎮痛活性肽DKK及其衍生物或類似物或活性片段的條件 下培養步驟2的被轉化的宿主細胞；

4.收獲并純化所得到的系列鎮痛活性肽DKK及其衍生物或類似物或活性片段。

本發明的第四個目的是提供含有如上限定的系列鎮痛活性肽DKK及其衍生 物或類似物或活性片段和一種或多種醫藥上可接受的載體或賦形劑的藥物組合 物。

本發明的另一個目的是提供如上限定的系列鎮痛活性肽DKK及其衍生物或 類似物或活性片段在生產鎮痛藥物中的應用。

本發明提供了一種上述載體轉化的宿主細胞。

本發明提供的上述表達產物分離純化可使用鹽析沉淀、超濾、離子交換層 析、疏水作用層析和凝膠過濾等方法，從細胞的溶胞產物及培養液中分離并純 化所需的表達產物。在產物的分離和純化過程中，可使用十二烷基磺酸鈉-聚丙 烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE)、酶聯免疫吸附法(ELISA)或蛋白免疫印跡法 (WESTERN)檢測產物的存在及相應分子大小。

本發明還提供了系列鎮痛活性肽DKK及其衍生物或類似物或活性片段在生 物制藥領域的應用，具體地說包括鎮痛生物活性的應用。

本發明首次進行系列鎮痛活性肽DKK及其衍生物或類似物或活性片段的小 鼠體內鎮痛生物學活性實驗。

本發明進一步涉及含有上述系列鎮痛活性肽DKK及其衍生物或類似物或活 性片段和至少一種醫藥上可接受的惰性載體或賦形劑的藥物組合物。可按照制 藥工業領域已知的基本原則和方法制備適于胃腸道外途徑給藥的藥物組合物 (如參見Remington’s?Pharmaceutical?Science，15th.，Mack?Publishing Company，1980)?？赏ㄟ^各種給藥途徑，特別是靜脈內、肌肉內、關節內、腹 腔內、鼻內、皮內、皮下等胃腸道外途徑投用本發明的藥物組合物。