[發明專利]粗壯脈紋孢菌菌株

無效

• 申請號: 201010120077.4
• 申請日: 2010-02-05
• 公開（公告）號: CN101899399A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發明（設計）人: 鄧澤元;劉文群;賈才華;范亞葦;李靜;余永紅;吳丹
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N15/01;C12R1/645
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

技術領域

本發明涉及一種粗壯脈紋孢菌菌株。

背景技術

糧食生產，污染預防，環境整治，可再生材料，這幾方面是影響可持續發展的主要因素。隨著不可再生資源的逐漸消耗，可再生資源的利用成為研究熱點，其中纖維素作為一種數量極其龐大的可再生資源將會成為食品等各領域的重要原料。

由于纖維素通常是以不溶性的纖維呈晶狀排列形式存在，再加上纖維素分子與其他多糖如半纖維素，果膠等結合在一起，而外面又包裹木質素，致使人們在利用纖維素之前需進行強酸或強堿預處理，或者進行高溫高壓處理。這個過程耗能巨大，成本昂貴，而且還會污染周圍環境，給生態環境帶來不良后果。

所以生物降解纖維素一直是人們努力尋求解決問題的方向。現研究能分泌纖維素酶的微生物主要有真菌、細菌、放線菌和一些原生動物。一般來說，細菌分泌纖維素酶量少，放線菌雖能在纖維素上生長，但分解纖維素的能力較弱，所以對霉菌產纖維素酶能力的研究較多。

發明內容

本發明的目的在于提供一種粗壯脈紋孢菌菌株，從自然界分離，純化出一株粗壯脈紋孢菌原始菌株，然后誘變使之產纖維素酶能力增強。

本發明是這樣來實現的，其特征是命名為粗壯脈紋孢菌菌株(Neurospora.crassa)，現保存在國家知識產權局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2009年6月3日，保藏單位：中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號：CGMCC3088。

提取方法為：

(1)從豆制品中提取發酵豆渣，用蒸餾水制成菌懸液；

(2)配置選擇性培養基：按重量磷酸二氫鉀∶蛋白胨∶微晶纖維素∶瓊脂比為1.5∶2.0∶15∶22混合，用接種環將菌體樣品劃線于選擇性培養基進行分離培養；

(3)選用PDA培養基為鑒定培養基，對分離純化好的菌株進行鑒定；

(4)使用60min終濃度為1％的硫酸二乙酯與3min?UV復合誘變步驟(3)分離純化得到性狀穩定的粗壯脈紋孢菌原始菌株；

(5)對誘變菌株進行反復初篩，復篩得到性狀穩定，酶活更高的菌株；

(6)誘變菌株，確定利于其纖維素酶活力的發酵溫度為30℃～38℃、初始PH為4.8～6.0、接種量6％～10％和發酵時間為72h～120h。

本發明的優點是：1、菌株成熟孢子含大量天然β-胡蘿卜素；2、利用產纖維素酶能力較強菌株發酵農副產品殘渣，可大幅度降低粗纖維含量，改善其品質，拓展殘渣利用范圍；3、利用微生物發酵農副產品殘渣，原料易得價格低廉，生產設備投資少，效益大；4、利用微生物發酵農副產品殘渣生產蛋白飼料，不僅能變廢為寶，減少環境污染，又能緩解一些蛋白質飼料嚴重短缺的壓力，節約大量糧食。

具體實施方式

實施例1：

將豆制品作坊采集的菌體樣品用蒸餾水溶解，并用玻璃珠將其充分混勻。后于無菌操作條件下用接種環取少量菌懸液劃線于選擇性培養基進行菌體分離，純化。使用60min終濃度為1％的硫酸二乙酯與3min?UV復合誘變分離純化得到的性狀穩定的粗壯脈紋孢菌原始菌株，然后進行反復初篩，復篩，最終獲得一株性狀穩定，產纖維素酶能力更強的誘變菌株。以纖維素酶活為考察指標，實驗發酵溫度、初始PH、接種量和發酵時間等培養條件對菌體所產酶活的影響。結果最適發酵溫度為32℃，初始PH為6.0，接種量為8％，發酵時間為72h。

實施例2：

將豆制品作坊采集的菌體樣品用蒸餾水溶解，并用玻璃珠將其充分混勻。后于無菌操作條件下用接種環取少量菌懸液劃線于選擇性培養基進行菌體分離，純化。使用70min終濃度為1％的硫酸二乙酯與5min?UV復合誘變分離純化得到的性狀穩定的粗壯脈紋孢菌原始菌株，然后進行反復初篩，復篩，最終獲得一株性狀穩定，產纖維素酶能力更強的誘變菌株。以纖維素酶活為考察指標，實驗發酵溫度、初始PH、接種量和發酵時間等培養條件對菌體所產酶活的影響。結果最適發酵溫度為30℃，初始PH為4.8，接種量為6％～8％，發酵時間為84h～96h。

實施例3：

將豆制品作坊采集的菌體樣品用蒸餾水溶解，并用玻璃珠將其充分混勻。后于無菌操作條件下用接種環取少量菌懸液劃線于選擇性培養基進行菌體分離，純化。使用60min終濃度為1.5％的硫酸二乙酯與6min?UV復合誘變分離純化得到的性狀穩定的粗壯脈紋孢菌原始菌株，然后進行反復初篩，復篩，最終獲得一株性狀穩定，產纖維素酶能力更強的誘變菌株。以纖維素酶活為考察指標，實驗發酵溫度、初始PH、接種量和發酵時間等培養條件對菌體所產酶活的影響。結果最適發酵溫度為38℃，初始PH為5.0，接種量為10％，發酵時間為100h～120h。