[發(fā)明專(zhuān)利]一種空腸彎曲菌熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010118477.1
• 申請(qǐng)日: 2010-03-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101886120A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣原;祝長(zhǎng)青;薛峰;欒軍;邵景東;陳國(guó)強(qiáng);唐泰山;張常印;張睿;沈崇鈺;吳斌
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64
• 代理公司: 南京眾聯(lián)專(zhuān)利代理有限公司 32206
• 代理人: 王荷英

1.一種空腸彎曲菌熒光定量PCR基因檢測(cè)試劑盒，包括如下試劑：

(1)PCR?MIX反應(yīng)液：5×FQ?PCR?buffer、濃度為10uM的引物混合物、濃度為10uM的TaqMan探針混合物、濃度為10mM的dNTPs和ddH₂O，其中所述引物混合物中含有：16S?rRNA上游引物F、16S?rRNA下游引物R、上游引物hipO-F和下游引物hipO-R，TaqMan探針混合物中含有：16S?rRNA-P和hipO-P；

所述16S?rRNA上游引物F序列為：5’-TGCTTAACACAAGTTGAGTAGG-3’；

所述16S?rRNA下游引物R序列為：5’-TTCCTTAGGTACCGTCAGAA-3’；

所述上游引物hipO-F序列為：5’-TAGGACTTCGTGCAGATATGG-3’；

所述下游引物hipO-R序列為：5’-AATCCATCTTCTATCATTGCCT-3’；

所述16S?rRNA-P序列為：5’-AACCCTGACGCAGCAACGCCGC-3’，其5’端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)，3’端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)；

所述hipO-P序列為：5’-AGCACCACCCAAACCCTCTTCAGC-3’，5’端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)，3’端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)。

(2)Taq酶；

(3)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品和陰性標(biāo)準(zhǔn)品，所述陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品是濃度為1×10⁷copies/mL的目的片段重組質(zhì)粒。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述PCR?MIX反應(yīng)液中所述5×FQ?PCR?buffer、引物混合物、TaqMan探針混合物、dNTPS和ddH₂O的體積混合比為10∶1∶0.5∶1∶30.5。

3.一種用權(quán)利要求1或2所述試劑盒檢測(cè)空腸彎曲菌的方法，包括如下步驟：

(1)樣品及陽(yáng)性對(duì)照的DNA提取

(2)反應(yīng)體系中含有：PCR?MIX反應(yīng)液24μL、Taq酶2μL，樣品DNA提取液4μL，陽(yáng)性模板為重組質(zhì)粒，陰性模板為ddH₂O；反應(yīng)程序?yàn)椋?3℃反應(yīng)2min，93℃反應(yīng)30s，58℃反應(yīng)45s，45個(gè)循環(huán)。

(3)結(jié)果分析：Ct值小于35個(gè)循環(huán)且呈S型擴(kuò)增曲線的為陽(yáng)性，即樣品中有空腸彎曲菌。