[發明專利]一種從魚膠原蛋白中分離功能多肽的方法

無效

• 申請號: 201010117306.7
• 申請日: 2010-03-04
• 公開（公告）號: CN101747427A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 苗強;張貴鋒;白義化;蘇志國
• 申請（專利權）人: 威海市宇王集團有限公司;中國科學院過程工程研究所
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/16
• 代理公司: 威海科星專利事務所 37202
• 代理人: 王元生

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種以魚膠原蛋白為原料分離功能多肽的方法。

背景技術

我們知道，魚膠原蛋白是指以魚鱗或魚皮為原料采用熱處理、酸/堿處理、酶法降解或結合多種方式降解獲得的混合物，其主要成份是魚鱗或魚皮中膠原降解后形成的分子量不均一的多肽類物質。魚膠原蛋白可作為功能食品或保健品，具有提高人體免疫力、促進鈣的吸收、改善血液微循環以及補充氨基酸營養成份等功能，從魚膠原蛋白中有效識別與分離不同功能的多肽組份是近年來魚膠原蛋白產品開發中的盲點。

傳統的魚膠原蛋白產品開發的重點主要集中于魚膠原蛋白制備工藝及其對產品分子量范圍及性能的影響。韓國Hee-GukByun利用離子交換色譜和凝膠過濾色譜的方法從膠原蛋白中分離出具有抑制血管緊張素轉化酶活性的多肽（ProcessBiochemistry，2001，36：1155-1162）；日本MaruyamaS從膠原蛋白中分離出可抑制血小板活性的多肽（Biochimi.Biophysi.Acta；1993,?1164,215-223）；韓國KimSK采用凝膠過濾色譜結合離子交換和反相色譜的方法從魚皮明膠中分離出具有抗氧化功能的組份（JAgricFoodChem，2001，49(4):1984-9）。傳統的魚膠原蛋白中不同多肽的分離方法主要基于分子量范圍、帶電荷狀態等性質進行分離，存在分辨率低和特征性不強等缺點。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服上述現有技術的不足，提供一種步驟合理、具有分辨率高和特征性強的基于親和層析的從魚膠原蛋白中分離功能多肽的方法。

本發明解決上述技術問題采用的技術方案是：一種從魚膠原蛋白中分離功能多肽的方法，其步驟是：

（1）將魚膠原蛋白溶于水，制成膠原蛋白溶液，并將該溶液的pH值調至6.0-9.0；

（2）將膠原蛋白溶液上親和層析柱，循環上樣至親和層析柱吸附樣品達到飽和；

（3）使用淋洗劑將未與層析介質配基結合的多肽淋洗出；

（4）使用洗脫劑將與親和層析介質配基結合的多肽洗脫出，洗脫過程的溫度可控制在15－37℃；

（5）利用凝膠過濾層析法或膜超濾的方法將得到的洗脫液濃縮，得到濃縮液；

（6）將濃縮液冷凍干燥，所得白色粉末即魚膠原蛋白中的功能多肽。

本發明基于親和層析的從魚膠原蛋白中分離功能多肽的方法中，如果待分離的膠原蛋白原料是水溶液，則省去（1）所述的膠原蛋白溶解過程，直接將膠原蛋白溶液的pH值調制6.0-9.0。

本發明所述的魚膠原蛋白可以是魚鱗膠原蛋白或魚皮膠原蛋白。

本發明所述的親和層析柱中層析介質的配基可以是纖維連接蛋白。

本發明所述的洗脫劑可以是含2－8mol/L脲、pH值為3.0－8.0的緩沖液，也可以是含5－50％乙醇的水溶液或5－50％乙腈的水溶液。如果采用5－50％乙醇的水溶液或5－50％乙腈的水溶液作為洗脫劑，則省去（5）所述的利用凝膠過濾層析法或膜超濾的方法將得到的洗脫液濃縮，得到濃縮過程，洗脫液直接進行冷凍干燥。

本發明中纖維連接蛋白可與膠原蛋白降解物中的許多多肽特異性結合，利用纖維連接蛋白等作為配基，采用親和層析的方法分離魚膠原蛋白中的部分多肽，對照現有技術，本發明步驟合理、方法簡單，具有分辨率高和特征性強等優點。

具體實施方式

?下面結合實施例對本發明做進一步描述。

實施例1：

一種從魚膠原蛋白中分離功能多肽的方法，其以2mg/ml的魚鱗膠原蛋白水溶液為原料，從該魚鱗膠原蛋白中分離功能多肽的方法步驟是：

（1）將原料魚鱗膠原蛋白水溶液的pH調至7.0；

（2）將魚鱗膠原蛋白水溶液上樣至親和層析柱，循環上樣至親和層析柱吸附樣品達到飽和，也就是說直至透過液中檢測出膠原蛋白。親和層析柱配基：人血漿纖維連接蛋白，柱填料體積40ml，填料粒徑：60－120微米；

（3）使用20ml0.2mol/L碳酸氫銨作為淋洗劑淋洗層析柱，流速1ml/min，將未與層析介質配基結合的多肽淋洗出；

（4）使用20％乙醇溶液在30℃下洗滌層析柱,將與親和層析介質配基結合的多肽洗脫出，流速1ml/min，收集前30min組份；

（5）將收集到的組份直接冷凍干燥，獲得的白色粉末即為魚鱗膠原蛋白中的功能多肽。

本發明中利用纖維連接蛋白等作為配基，采用親和層析的方法分離魚膠原蛋白中的部分多肽，步驟合理、方法簡單，具有分辨率高和特征性強等優點。

實施例2：