[發(fā)明專利]一株苯并[a]芘降解菌及其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010115822.6
• 申請(qǐng)日: 2010-03-02
• 公開（公告）號(hào): CN101974443A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 豆俊峰;杜勇超;程莉蓉;丁愛中;陳海英;范福強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;B09C1/10;C12R1/05
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于受污染土壤與水的生物降解處理技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一株苯并[a]芘降解菌及其應(yīng)用。?

背景技術(shù)

多環(huán)芳烴(Polycyclic?Aromatic?Hydrocarbons，PAHs)是一類含有兩個(gè)或兩個(gè)以上苯環(huán)的有毒有機(jī)污染物，具有強(qiáng)烈的致癌作用、致畸作用和致突變作用。PAHs能通過生物累積及食物鏈的傳遞作用對(duì)生態(tài)環(huán)境和人體健康造成極大危害，已引起各國(guó)環(huán)境科學(xué)家的高度重視。美國(guó)環(huán)保局早在80年代就已把16種未帶分支的PAHs確定為環(huán)境中的優(yōu)先污染物，我國(guó)也把PAHs列入環(huán)境污染的黑名單中。生物降解是實(shí)現(xiàn)恢復(fù)PAHs污染環(huán)境的最有效手段之一。?

一般來說，隨著多環(huán)芳烴苯環(huán)數(shù)量的增加，其降解速率降低。因此，低分子量的多環(huán)芳烴在環(huán)境中能較快被降解，在環(huán)境中存在的時(shí)間較短，而高分子量的多環(huán)芳烴則難于降解，較長(zhǎng)期存在于環(huán)境中。然而由于缺少高效的多環(huán)芳烴降解菌，制約了多環(huán)芳烴污染土壤生物修復(fù)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展和應(yīng)用。現(xiàn)有的微生物降解PAHs的研究普遍集中在低分子量PAHs的降解微生物的篩選、分離與純化，而對(duì)于高效降解高分子量PAHs的微生物報(bào)道較少。分離與純化高分子量PAHs高效降解菌是生物修復(fù)PAHs污染環(huán)境的關(guān)鍵。?

因此，需要從污染的環(huán)境中馴化篩選出對(duì)高分子量的多環(huán)芳烴(如苯并[a]芘)降解速率較快的微生物菌種，然后再把它們應(yīng)用于實(shí)際PAHs污染環(huán)境的生物治理，這對(duì)于治理和修復(fù)多環(huán)芳烴污染土壤有重要的意義。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一株苯并[a]芘降解菌及其應(yīng)用。所用菌株經(jīng)鑒定為產(chǎn)堿菌Alcaligene?sp，2010年3月1日保藏于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，該中心位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，菌種保藏號(hào)為CGMCC3638。該菌株16S?rDNA的Genbank登錄號(hào)為FJ529025.1，將該菌株制成含菌量為1.25×10⁸CFU/ml的菌懸液，可用于環(huán)境中苯并[a]芘的降解。?

從污染土壤中分離純化所述苯并[a]芘降解菌的步驟如下：?

(1)選取受石油污染的土壤，將其通過直徑為2mm的網(wǎng)篩后立即放置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?

(2)向體積為1000mL的開口玻璃瓶中加入25～30mL濃度為1g/L的苯并[a]芘的丙酮混合溶液，為除去丙酮將玻璃瓶開口放置2天。?

(3)向步驟(2)中開口玻璃瓶中加入500～600mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在轉(zhuǎn)速為100r/min的條?件下攪拌40～50min后加入步驟(1)中的土壤250g；然后置于溫度為25～30℃的環(huán)境中在轉(zhuǎn)速為100r/min的條件下攪拌富集馴化培養(yǎng)30d，在培養(yǎng)期間定期向玻璃瓶中加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基以維持玻璃瓶中泥漿系統(tǒng)的水土比例保持不變；其中基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成為：NH₄Cl：1.5g·L^-1，KH₂PO₄：1.5g·L^-1，MgCl₂：0.25g·L^-1，CaCl₂·2H₂O：0.10g·L^-1。?

(4)向體積為100～200mL的錐形瓶中加入10mL濃度為1g/L的苯并[a]芘的丙酮混合溶液，為除去丙酮將錐形瓶開口放置2天。?

(5)向步驟(4)中的錐形瓶中入50mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基、0.5mL微量金屬液和0.1mL維生素c溶液；其中微量金屬液的組成為：CoCl₂·6H₂O：35mg·L^-1，CuCl₂：0.20mg·L^-1，H₃BO₃：6.0mg·L^-1，MnCl₂·4H₂O：25mg·L^-1，Na₂MoO₄·2H₂O：3.0mg·L^-1，NiCl₂·2H₂O：2.0mg·L^-1，ZnCl₂：2.5mg·L^-1。?