[發(fā)明專利]一株芘降解菌及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010115821.1
• 申請日: 2010-03-02
• 公開（公告）號: CN101974442A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 豆俊峰;杜勇超;丁愛中;程莉蓉;范福強(qiáng);陳海英
• 申請（專利權(quán)）人: 北京師范大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;B09C1/10;C02F3/34;C02F3/02;A62D3/02;C12R1/025;C02F101/32;A62D101/20
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于受污染土壤與水的生物降解處理技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一株芘降解菌及其應(yīng)用。?

背景技術(shù)

多環(huán)芳烴(Polycyclic?Aromatic?Hydrocarbons，PAHs)是一類含有兩個或兩個以上苯環(huán)，以線狀、角狀或簇狀排列的稠環(huán)型化合物，具有疏水性、低溶解度、低蒸汽壓、高熔點(diǎn)和沸點(diǎn)、辛醇-水分配系數(shù)高等特性。多環(huán)芳烴類化合物具有強(qiáng)烈的致癌作用、致畸作用和致突變作用，一般來說，2～3環(huán)的低分子量PAHs具有顯著的急性毒性，而某些高分子量的PAHs具有潛在的致癌性。由于PAHs分子中存在共軛大π鍵電子體系，因此具有較高的穩(wěn)定性，其光解作用和生物降解作用緩慢，能夠通過各種環(huán)境介質(zhì)長距離遷移并長期存在于環(huán)境中，通過環(huán)境蓄積、生物蓄積、生物轉(zhuǎn)化或化學(xué)反應(yīng)等方式損害健康和環(huán)境，已引起各國環(huán)境科學(xué)家的高度重視。美國環(huán)保局早在80年代就已把16種未帶分支的PAHs確定為環(huán)境中的優(yōu)先污染物，我國也把PAHs列入環(huán)境污染的黑名單中。生物降解是實(shí)現(xiàn)恢復(fù)PAHs污染環(huán)境的最有效手段之一，常見的具有降解PAHs功能微生物有假單胞菌屬(Pseudomonas)、鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)、紅球菌屬(Rhodococcus)、分枝桿菌屬(Mycobacterium)、芽抱桿菌屬(Bacillus)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、氣單胞菌屬(Aeromonas)、拜葉林克氏菌屬(Beijernckia)、棒狀桿菌屬(Corynebaeterium)、藍(lán)細(xì)菌(Cyanobacteria)、微球菌屬(Micrococcus)、諾卡氏菌屬(Nocardia)和弧菌屬(Vibrio)等。?

然而由于缺少高效的多環(huán)芳烴降解菌，制約了多環(huán)芳烴污染土壤生物修復(fù)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展和應(yīng)用。因此，需要從污染的環(huán)境中馴化篩選出對多環(huán)芳烴降解速率較快的微生物菌種，然后再把它們應(yīng)用于實(shí)際PAHs污染環(huán)境的生物治理，這對于治理和修復(fù)多環(huán)芳烴污染土壤有重要的意義。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一株芘降解菌及其應(yīng)用。所用菌株經(jīng)鑒定為無色桿菌Achromobacter?sp.，2010年3月1日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，該中心位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院中國科學(xué)院微生物研究所，菌種保藏號為CGMCC3637。該菌株16S?rDNA的Genbank登錄號為EU220009.1，將該菌株制成含菌量為1.25×10⁸CFU/ml的菌懸液，可用于環(huán)境中芘的降解。?

從污染土壤中分離純化所述芘降解菌的步驟如下：?

(1)選取受石油污染的土壤，將其通過直徑為2mm的網(wǎng)篩后立即放置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?

(2)向體積為1000mL的開口玻璃瓶中加入25～30mL濃度為1g/L的芘的丙酮混合溶液，為除去丙酮將玻璃瓶開口放置2天。?

(3)向步驟(2)中開口玻璃瓶中加入500～600mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在轉(zhuǎn)速為100r/min的條件下攪拌40～50min后加入步驟(1)中的土壤250g；然后置于溫度為25～30℃的環(huán)境中在轉(zhuǎn)速為100r/min的條件下攪拌富集馴化培養(yǎng)30d，在培養(yǎng)期間定期向玻璃瓶中加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基以維持玻璃瓶中泥漿系統(tǒng)的水土比例保持不變；其中基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成為：NH₄Cl：1.5g·L^-1，KH₂PO₄：1.5g·L^-1，MgCl₂：0.25g·L^-1，CaCl₂·2H₂O：0.10g·L^-1。?

(4)向體積為100～200mL的錐形瓶中加入10mL濃度為1g/L的芘的丙酮混合溶液，為除去丙酮將錐形瓶開口放置2天。?