[發(fā)明專利]檢測鼻咽癌放射敏感性基因的方法及其引物與熒光探針

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010114536.8
• 申請日: 2010-02-26
• 公開（公告）號: CN102168129A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭懿;陳甲信;李瑤;裘敏燕;樓屹
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博星基因芯片有限責任公司;廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，先通過逆轉(zhuǎn)錄(RT)mRNA樣品得到cDNA，再利用實時熒光定量PCR技術(shù)，精確定量被檢測樣本中基因表達量。

背景技術(shù)

鼻咽癌(Nasopharyngeal?carcinoma，NPC)好發(fā)于中國南方各省及東南亞地區(qū)，其病因涉及EB病毒、遺傳因素(遺傳易感性)、多種癌基因和抑癌基因的相互作用以及環(huán)境和飲食因素。近年來隨著分子生物學及其技術(shù)的飛速發(fā)展，人們通過對癌基因和抑癌基因的深入研究，認識到癌變是一個涉及多重基因事件的復雜過程。鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展及其生物學行為的研究也已進入基因水平，關(guān)于鼻咽癌癌基因和抑癌基因的研究方興未艾。鼻咽癌有很多分化類型，常見于咽隱窩，位于咽鼓管咽口內(nèi)側(cè)角的后內(nèi)側(cè)壁。鼻咽癌發(fā)病年齡大多在40～60歲之間，男性多于女性。世界大部分地區(qū)鼻咽癌發(fā)病率較低，一般在1/10⁵以下。鼻咽癌的發(fā)病有明顯的地區(qū)聚集性和種族性現(xiàn)象，多見于黃種人，患者主要集中在廣東、潮汕和福州方言人群以及這些人群移民到海外者。我國南方(廣東、廣西、福建和湖南等省)和東南亞一些國家是全世界鼻咽癌發(fā)病率最高的地區(qū)，特別是廣東中西部的肇慶、佛山和廣州地區(qū)更高。肇慶四會的男性NPC發(fā)病率為25.12/10⁵，女性為12.11/10⁵；居住在廣東省中部以及講廣東地方語的男性發(fā)病率高達30/10⁵～50/10⁵。

流行病調(diào)查指出鼻咽癌的病因可能與下列因素有關(guān)：①EB病毒感染。②環(huán)境與飲食：環(huán)境因素也是誘發(fā)鼻咽癌的一種原因。在廣東，調(diào)查發(fā)現(xiàn)癌高發(fā)區(qū)的大米和水中的微量元素鎳含量較低發(fā)區(qū)為高。在鼻咽癌患者的頭發(fā)中，鎳含量亦高。動物試驗表明，鎳能促進亞硝胺誘發(fā)鼻咽癌。也有報道食用咸魚及腌制食物是中國南方鼻咽癌高危因素，且與食咸魚的年齡，使用的期限、額度及烹調(diào)方法有關(guān)。③遺傳因素：鼻咽癌病人有種族及家族聚集現(xiàn)象，如居住在其他國家的中國南方人后代仍保持著很高的鼻咽癌發(fā)病率，這提示鼻咽癌可能是遺傳性疾病。

由于鼻咽的解剖部位深在，解剖結(jié)構(gòu)復雜，病理主要為非角化型未分化癌以及易出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)及遠處轉(zhuǎn)移，在初診的患者中，III、IV期鼻咽癌約占總病例的70％左右。放射治療在過去很長一段時間都是鼻咽癌的標準治療手段，但單純放射治療鼻咽癌的5年生存率僅50％左右，而晚期鼻咽癌(III、IV)的5年生存率更低，約10％～40％，治療失敗的主要原因是局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移。因此，研究如何改善鼻咽癌患者的治療效果變得非常必要和有意義。因鼻咽癌是對化療相對敏感的腫瘤，因此尋找有效的耐受性好的化療藥物以及放化療的結(jié)合方式是近年來的研究熱點。此外，隨著分子生物學的發(fā)展，已發(fā)現(xiàn)一些生物學指標能預測惡性腫瘤的預后及療效，在風險評估及制定治療策略時發(fā)揮重要作用。

研究表明ZNF187，CLSTN1，HBG2，PRO0149，NME6，SMARCC1，GL009，GL010，GL01這9個基因在鼻咽癌放射敏感型患者和鼻咽癌放射抗拒型患者中的表達有顯著差異，通過檢測這9個基因的表達情況可以為鼻咽癌的治療提供指導。

傳統(tǒng)的基因診斷技術(shù)主要運用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)或逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法大量擴增待測基因，然后通過溴化乙錠染色和瓊脂糖凝膠電泳定量待測基因。以上方法有著極高的高靈敏度，但基于PCR反應(yīng)的特點，反應(yīng)終點的產(chǎn)物量往往無法正確反映反應(yīng)初始階段DNA的含量，因此定量不夠精確，同時其檢測的分辨率也不高，DNA的量的差異如果低于五倍，往往檢測不出。近年來不斷完善的實時定量PCR技術(shù)，在PCR反應(yīng)體系中加入了熒光基團，利用熒光信號的積累監(jiān)控整個PCR的進程，最后通過Ct值和標準曲線對樣品中的DNA精確定量。由于只對指數(shù)期反應(yīng)的產(chǎn)物進行檢測和熒光基團的信號放大作用，它克服了傳統(tǒng)PCR的定量不精確，分辨率低的缺點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供針對鼻咽癌放射敏感性基因定性、定量檢測的引物。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：

用于檢測ZNF187基因的引物，是由序列表中SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2組成的引物對。

用于檢測CLSTN1基因的引物，是由序列表中SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4組成的引物對。

用于檢測HBG2基因的引物，是由序列表中SEQ?ID?NO：5和SEQ?ID?NO：6組成的引物對。