[發明專利]牛分枝桿菌Taqman熒光定量PCR檢測方法無效
| 申請號： | 201010113248.0 | 申請日： | 2010-02-23 |
| 公開（公告）號： | CN102162007A | 公開（公告）日： | 2011-08-24 |
| 發明（設計）人： | 林祥梅;賈廣樂;韓雪清;吳紹強;劉建;梅琳;王彩霞;王慧煜 | 申請（專利權）人： | 中國檢驗檢疫科學研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/64;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飛 |
| 地址： | 100029 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 分枝桿菌 taqman 熒光 定量 pcr 檢測 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種牛分枝桿菌Taqman熒光定量PCR檢測用引物及探針，其中，
上游引物為：5’-TGAAGTAGTAATGTGCGAGCTGAG-3’；
下游引物為：5’-CGTTGTAGGCCACTCCAAGAG-3’；以及
探針為：5’-JOE-CGCTTCTGCACGACTACGGCTTGTATGA-Eclipse-3’。
2.一種含權利要求1所述引物及探針的檢測試劑盒。
3.一種利用權利要求1所述的引物及探針檢測牛分枝桿菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)目的基因的擴增
以牛分枝桿菌基因組DNA為模板，進行PCR反應，其中，PCR上游引物為5’-ATCGTGAATCGTCGAGTGATG-3’，下游引物為5’-ACCCAGAAGGCGAACAGA-3’，回收PCR擴增產物；
2)目的基因的克隆
將步驟1)的目的基因連接在PGEM-T?easy載體上并轉化至大腸桿菌感受態細胞，篩選陽性轉化子，進行PCR檢測并測序，提取陽性重組質粒，計算重組質粒的拷貝數；
3)Taqman熒光定量PCR檢測
以陽性重組質粒DNA為模板，利用權利要求1所述引物及探針，進行Taqman熒光定量PCR檢測。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，其中Taqman熒光定量PCR檢測的退火溫度為50.5℃。
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