[發(fā)明專利]南非Ⅱ型口蹄疫抗原表位多肽及其篩選方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010111010.4
• 申請日: 2010-02-10
• 公開（公告）號: CN101812120A
• 公開（公告）日: 2010-08-25
• 發(fā)明（設計）人: 林祥梅;吳紹強;王彩霞;李雅靜
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;G01N33/53;G01N33/569
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及南非II型口蹄疫病毒主要抗原表位上的六條多肽及篩選方法。

背景技術(shù)

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth?disease?virus，F(xiàn)MDV)引起的偶蹄動物的一種急性、高度接觸性傳染病，一度被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類疫病之首。口蹄疫屬于世界流行性傳染病，它的暴發(fā)給全球人類健康以及畜牧業(yè)生產(chǎn)造成了極大的危害。

口蹄疫病毒屬于小RNA病毒科，口蹄疫病毒(aphthovirus)屬。FMDV是由單股正鏈RNA組成的140S顆粒，它由VP1(1D)、VP2(1B)、VP3(1C)和VP4(1A)四種結(jié)構(gòu)蛋白各60拷貝組成。FMDV基因組全長約8500bp，依次由5′UTR、ORF和3′UTR及Poly(A)尾組成。5′UTR長約1300bp，它包括在病毒翻譯和RNA復制中起作用的5個功能區(qū)：S片段、Poly(C)、cre區(qū)、IRES(內(nèi)部核糖體進入位點)等。3′UTR可以結(jié)合參與RNA復制某些小RNA病毒蛋白，因此它對于病毒基因組復制具有重要作用。Poly(A)尾可能也在FMDV翻譯和小RNA病毒的RNA復制中起作用。FMDV的ORF長約6500bp，由L基因、P1結(jié)構(gòu)蛋白基因、P2和P3非結(jié)構(gòu)蛋白基因以及起始密碼子和終止密碼子組成，編碼一個大的聚蛋白。L區(qū)包括Lab、Lb兩種蛋白。結(jié)構(gòu)蛋白P1區(qū)包含了FMDV的主要抗原位點。P1基因編碼4種病毒的結(jié)構(gòu)蛋白，即VP1、VP2、VP3和VP4。VP1～VP3組成衣殼蛋白亞單位，VP4位于病毒顆粒內(nèi)部。P2基因編碼3種病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白，2A、2B、2C。P3基因編碼非結(jié)構(gòu)蛋白3A、Vpg、3C^pro和3D^pol。

目前，關(guān)于FMDV結(jié)構(gòu)蛋白的研究主要集中在VP1上，對VP1結(jié)構(gòu)和功能的研究表明，F(xiàn)MDV的O、A、C型和Asia?I型，其主要抗原位點都在VP1上。VP1暴露于病毒顆粒的表面，承受的選擇壓力最大，關(guān)鍵氨基酸的改變可導致抗原位點和單克隆抗體反應性的改變，使得VP1最容易發(fā)生變異，其變異常可導致毒株抗原性的變化，在口蹄疫免疫預防、遺傳演化中一直是研究的主要對象。但目前已有研究表明，在病毒的抗原結(jié)構(gòu)中VP1～VP3都顯示了重要作用。Archarya對FMDV顆粒空間構(gòu)型的研究表明，VP1～VP3都有氨基酸位于病毒粒子表面，都能參與抗原位點的形成。

口蹄疫病毒的抗原結(jié)構(gòu)十分復雜，不同的血清型有著不同的抗原位點。在口蹄疫病毒的七個血清型中，以O、A、C和Asia?I型的抗原位點研究最多，而對南非型的研究較少。在FMDV的四種結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2、VP3、VP4中，VP1是誘導產(chǎn)生中和抗體的主要成分，VP1上的G-H環(huán)和保守的RGD(Arg-Gly-Asp)基序參與構(gòu)成了重要的抗原位點。此外，對FMDV空間構(gòu)型的研究發(fā)現(xiàn)VP2、VP3都能參與抗原位點的形成。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供南非II型口蹄疫病毒主要抗原表位的六條多肽。

本發(fā)明的另一目的是提供南非II型口蹄疫病毒主要抗原表位六條多肽的篩選方法。

為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供南非II型口蹄疫病毒主要抗原表位的六條多肽，分別位于抗原VP1的132～146和199～211位點；VP2的60～73和163～176位點；VP3的58～71和127～140位點，其氨基酸序列分別為：GECKYTQTSTAIRGD、HQSRDRFDAPIGV；RFFKEKLFDWTSDK、LGVNRHDQGKRHQA；DGKPYVVTKNNGDK、PGVNTDELPKTPEA，或這六條氨基酸序列經(jīng)替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

前述的南非II型口蹄疫病毒主要抗原表位六條多肽的篩選方法，包括如下步驟：1)采用軟件分析南非II型口蹄疫病毒的三種結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2和VP3的氨基酸特性，根據(jù)這些氨基酸特性設計并合成多肽片段；2)對合成的多肽進行抗原性分析，篩選出6條多肽，其氨基酸序列分別為：GECKYTQTSTAIRGD、HQSRDRFDAPIGV、RFFKEKLFDWTSDK、LGVNRHDQGKRHQA、DGKPYVVTKNNGDK和PGVNTDELPKTPEA。

前述的方法，其中合成多肽的抗原性分析包括反應原性檢測及免疫原性檢測。

前述的方法，其中反應原性檢測采用間接ELISA法。

南非II型口蹄疫主要抗原表位的六條多肽在檢測南非II型口蹄疫病毒中的應用。