[發(fā)明專利]SRY特異性TaqMan探針引物對與實(shí)時熒光SRY基因檢測試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010108247.7
• 申請日: 2010-02-10
• 公開（公告）號: CN101792802A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張磊;宋興勃;應(yīng)斌武;陸小軍;王蘭蘭
• 申請（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 成都科海專利事務(wù)有限責(zé)任公司 51202
• 代理人: 黃幼陵

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于性別決定基因(Sex-determining?region?Y，本專利申請文件中簡稱SRY基因) 檢測領(lǐng)域，特別涉及檢測SRY基因的TaqMan探針引物對及實(shí)時熒光檢測試劑盒。

背景技術(shù)

性別分化異常是一種常見的遺傳病，其發(fā)病率約為1％～3％。這類疾病長期困擾著患 者及其親屬，他(她)們無法分辨患者的性別，對患者身心和婚姻等造成嚴(yán)重傷害。人類性別決 定和分化是一個及其復(fù)雜的過程，其中SRY基因是性別分化的關(guān)鍵基因。SRY基因在未 分化的性腺中表達(dá)以后，大量與睪丸分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子和生長因子基因開始特異性表 達(dá)。SRY基因一直被認(rèn)為是睪丸決定因子的最佳候選基因，在胚胎發(fā)育早期的性組織中有 短暫的表達(dá)，導(dǎo)致原始性腺組織向睪丸組織分化。SRY基因的缺失或突變是造成性發(fā)育異 常的主要原因之一。對性發(fā)育異常患者進(jìn)行SRY基因檢測，有利于了解該類患者的遺傳學(xué) 病因，為其診斷和治療提供科學(xué)依據(jù)。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase?Chain?Reaction，本專利申請文件中簡稱PCR)是一種選 擇性體外擴(kuò)增DNA或cDNA的技術(shù)，為最常用的分子生物學(xué)技術(shù)之一。它包括三個基本步 驟：(1)變性：加熱模板DNA，使其解離成為單鏈；(2)退火：使人工合成的一對寡聚 核苷酸引物在較低溫度條件下(常為37-60℃)與模板DNA上需擴(kuò)增目的序列結(jié)合；(3) 延伸：在適宜溫度下(一般為72℃)，Taq?DNA聚合酶以dNTP為原料使引物端向前延伸， 合成與一條與模板堿基序列完全互補(bǔ)的DNA新鏈。由這三個基本步驟組成一輪循環(huán)，理論 上每一輪循環(huán)將使目的DNA擴(kuò)增一倍，新合成產(chǎn)生的DNA又可作為下一輪循環(huán)的模板，使 體系中目的片段呈指數(shù)迅速增長，將目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時內(nèi)體外擴(kuò)增至百萬 倍、千萬倍。因此，PCR技術(shù)一經(jīng)問世就被迅速而廣泛地用于分子生物學(xué)的各個領(lǐng)域。

實(shí)時熒光PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān) 測整個PCR進(jìn)程。該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與PCR相比，它特異 性更強(qiáng)，由引物和探針雙重保證，非特異性雙鏈DNA不會產(chǎn)生熒光信號、靈敏度更高、能 實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)，具有自動化程度高、有效解決PCR污染、實(shí)時性和準(zhǔn)確性的優(yōu)勢。

目前檢測SRY基因一般采用PCR技術(shù)，其觀察結(jié)果主要為凝膠電泳成像法，耗時、耗 力、靈敏度低且易污染。在現(xiàn)有技術(shù)中，尚未見應(yīng)用實(shí)時熒光PCR技術(shù)檢測SRY基因的報 道，也未見實(shí)時熒光PCR技術(shù)中涉及的SRY特異性TaqMan探針引物對及試劑盒的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供SRY特異性TaqMan探針引物對和實(shí)時熒 光SRY基因檢測試劑盒，以提高SRY基因檢測的準(zhǔn)確性和效率，并有效解決PCR的污染問 題。

本發(fā)明所述SRY特異性TaqMan探針引物對，由第一引物對、第一探針、第二引物對 和第二探針組成；所述第一引物對由正向引物和反向引物組成，第一引物對中的正向引物 的核苷酸序列為序列表中SEQ?ID?NO：1所示，第一引物對中的反向引物的核苷酸序列為 序列表中SEQ?ID?NO：2所示，第一探針的核苷酸序列為序列表中SEQ?ID?NO：3所示； 所述第二引物對由正向引物和反向引物組成，第二引物對中的正向引物的核苷酸序列為序 列表中SEQ?ID?NO：4所示，第二引物對中的反向引物的核苷酸序列為序列表中SEQ?ID NO：5所示，第二探針的核苷酸序列為序列表中SEQ?ID?NO：6所示。