[發明專利]一種農藥生物活性測定方法

無效

• 申請號: 201010107903.1
• 申請日: 2010-02-04
• 公開（公告）號: CN101788545A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 岳永德;操海群;湯鋒;花日茂;王進;姚曦;吳祥為;唐俊
• 申請（專利權）人: 國際竹藤網絡中心
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

技術領域：

本發明屬于農藥生物測定領域，具體涉及一種以鹵蟲(Artemia?Salina)為模式生物的農藥殺蟲活性生物測定方法。

背景技術：

生物活性篩選是農藥研發的重要環節，直接關系到新農藥開發的效率與成敗。傳＼統的殺蟲活性生物測定主要以粘蟲、家蠅、赤擬谷盜、米象、蚜蟲、玉米螟、小菜蛾、菜粉蝶幼蟲等標準試蟲為靶標生物。這些模式生物對環境條件的要求較高，試蟲的培養和大量提供是一個相當專業且較為困難的工作。另外，上述供試生物個體較大、消耗大量試材和化合物樣品、占用較大實驗空間、勞動強度大，因此，應用傳統生物測定技術進行殺蟲活性篩選的效率較低。當前，新農藥研發對于高通量生物活性篩選方法的需求越來越迫切。

鹵蟲(Artemia?Salina)又稱鹽水豐年蟲，在分類學上屬節肢動物門甲殼綱鰓足亞綱無甲目鹽水豐年蟲科，是一種廣溫耐高鹽的水生生物。鹵蟲含有豐富的蛋白質、脂肪、不飽和脂肪酸、微量元素和核黃素等營養物質，廣泛應用于水產養殖的優質餌料。由于鹵蟲具有對毒物敏感、個體微小、容易獲得與培養等特點，因此，有資料報導可應用于海洋、江河中有毒化學物質的毒性檢測，美國國家環保局(EPA)把鹵蟲列為排污的毒性試驗生物。但是，利用鹵蟲在農藥殺蟲活性生物測定方面的應用較少，至今未見利用鹵蟲進行農藥生物測定方法的專利公開。

發明內容：

本發明的目的就在于提供一種采用鹵蟲為對象的農藥生物活性測定和篩選方法，可以用于對現有農藥品種進行殺蟲活性的測定，也可以用于農藥抗藥性研究以及化合物或農藥對環境中水生生物的安全性檢測，尤其適合對植物提取物樣品進行殺蟲活性的快速篩選。

本發明采用的技術方案：

一種農藥生物活性測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將待測供試樣品物用蒸餾水溶解配制成母液；難溶于水的樣品先加入少量丙酮溶解，再用人工海水逐步稀釋得待測供試藥液，對于測供試樣品物為農藥時待測供試藥液濃度為0.005～5mg/L，測供試樣品物為植物提取物時待測供試藥液濃度為10～1000mg/L；

(2)移取鹵蟲液10uL，內含鹵蟲無節幼體30～40頭，于24孔培養板內，然后加入1.5mL待測供試藥液，置于25℃的光照度2000Lx、光照周期12L～12D的光照培養箱中培養；

(3)培養48h后，于解剖鏡下觀察鹵蟲無節幼體死亡個體數，計算校正死亡率，

評價待測樣品的殺蟲生物活性。

所述供試樣品是農藥現有的化合物殺蟲劑品種或植物提取物樣品。

人工海水的配制參考張福2002年公開的方法，其無機鹽組分及配比見表1。引證文獻：張福.鹵蟲Na/Mg比值對鹵蟲發育生長的影響.海湖鹽與化工，2002，32(2)：16-19。

本發明的優點為：

本發明提供的方法，該鹵蟲靶標對大部分農藥活性敏感，來源廣泛并容易大量飼養；測定成本低廉，方法簡單方便；所需樣品量微量，對于化合物樣品，一次消耗量小于0.05毫克，對于植物提取物樣品，一次消耗量小于1.5毫克，尤其適合微量樣品的篩選或測定。

具體實施方式：

為了更好地說明本發明，下面通過實施例予以進一步闡述。

實驗材料：

現有殺蟲劑品種，三唑磷、毒死蜱、氟鈴脲、阿維菌素、噠螨靈原藥均為市售購得；

竹葉提取物樣品，將供試不同竹種的竹葉自然風干，粉碎成末，分別稱取25g竹粉于索式提取器內，丙酮浸泡過夜。在水浴溫度65℃，液料比10∶1的比例下提取8～9h，至提取液無色。然后將提取液減壓濃縮至干，4℃冷藏備用。

不同規格的多孔培養板為市售產品。

鹵蟲來源：市購鹵蟲卵，稱取鹵蟲卵0.010g于100mL量筒中，加入人工海水90mL，用NaHCO₃調節pH至8.0～8.5，置于25℃恒溫水浴鍋內，用一小型充氣泵由量筒底部緩緩充氣，使蟲卵保持懸浮狀態，光照(2000Lx)孵化。24h后，得到孵出約4h的I期鹵蟲無節幼體，利用鹵蟲的趨光性，吸管收集，備用。

試驗方法：

通過環境因子對鹵蟲生物測定方法影響的研究結果表明，以鹵蟲作為殺蟲活性生物測定的模式生物，其培養液中無機鹽的含量不能低于5‰，pH值應控制在7左右，培養溫度不宜超過35℃，測定過程中不宜24h持續光照。

供試樣品藥液的配制：將供試農藥原藥或竹葉提取物用少量丙酮溶解后，用蒸餾水配制成10g/L的母液，再用人工海水(pH保持中性)逐步稀釋至供試濃度。農藥原藥待測供試藥液濃度為0.005～5mg/L，竹葉提取物待測供試藥液濃度為10～1000mg/L；