[發明專利]阿薩希毛孢子菌2-1及其在制備丙烯酸中的應用

有效

• 申請號: 201010107491.1
• 申請日: 2010-01-30
• 公開（公告）號: CN101768555A
• 公開（公告）日: 2010-07-07
• 發明（設計）人: 張正波;高靚;裘娟萍;趙春田
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N9/80;C12P7/40;C12R1/645
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種產丙烯酰胺酶的菌株——阿薩希毛孢子菌(Trichosporon?asahii) 2-1，保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：湖北省武漢市珞珈山武 漢大學，430072，保藏日期2010年01月19日，保藏編號CCTCC?No： M?2010017。

2.如權利要求1所述的阿薩希毛孢子菌2-1在制備丙烯酰胺酶中的應用。

3.如權利要求1所述的阿薩希毛孢子菌2-1在制備丙烯酸中的應用。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述應用為：以丙烯酰胺為底 物，以阿薩希毛孢子菌2-1經發酵培養獲得的丙烯酰胺酶為催化劑，進 行水解反應，反應結束后，反應液經分離純化得到所述丙烯酸。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述發酵培養的發酵培養基終 濃度組成如下：丙烯酸3.0～10.0g/L，蔗糖10.0～20.0g/L，酵母膏0.01～ 15.0g/L，尿素0.01～5.0g/L，NaCl?1.0～5.0g/L，KH₂PO₄?0.01～1.0g/L， MgSO₄.7H₂O?0.01～2.0g/L，FeSO₄?0.01～1.0g/L，溶劑為水，pH6.5～8.5。

6.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述水解反應條件如下：反應 溫度5～45℃，反應pH?5.0～10.0，反應時間2～20h。

7.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述分離純化方法如下：反應 結束后，離心回收反應液中的菌體細胞，剩余清夜用乙酸異丁酯溶劑 萃取，萃取液經過精餾塔回收乙酸異丁酯，即得所述的丙烯酸。

8.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述應用方法如下：

(1)種子培養：取種子培養基，接種阿薩希毛孢子菌2-1，搖床轉速 150r/min，28℃培養20h作為種子液；所述種子培養基終濃度組 成如下：丙烯酸1.0g/L，蔗糖15.0g/L，葡萄糖5.0g/L，酵母膏 10g/L，NaCl?5g/L，KH₂PO₄?1.0g/L，MgSO₄.7H₂O?0.2g/L，FeSO₄0.01g/L，用去離子水配制，pH用氨水調至7.0；

(2)發酵培養：取發酵培養基，按照2～8％體積比接種種子液，25～ 45℃下培養18～48h，得到發酵液；所述發酵培養基終濃度組成 如下：丙烯酸3.0～10.0g/L，蔗糖10.0～20.0g/L，酵母膏0.01～ 15.0g/L，尿素0.01～5.0g/L，NaCl?1.0～5.0g/L，KH₂PO₄?0.01～1.0 g/L，MgSO₄.7H₂O?0.01～2.0g/L，FeSO4?0.01～1.0g/L，溶劑為水， pH?6.5～8.5；

(3)催化水解：發酵液離心收集菌體，用pH7.0～8.0磷酸鹽緩沖液配 制成菌懸液，加入丙烯酰胺，反應體系中丙烯酰胺初始濃度為 1～50g/L，菌體濃度以濕重計為1～20g/L，20～40℃水浴中轉化 5～10h；

(4)產物分離：轉化液離心回收菌體，離心上清液經乙酸異丁酯溶劑 萃取，萃取液經過精餾塔精餾去除溶劑，剩余液即為所述的丙烯 酸。