[發明專利]壯觀鏈霉菌SpLE-16及其在生產大觀霉素中的應用

有效

• 申請號: 201010107484.1
• 申請日: 2010-01-30
• 公開（公告）號: CN101748093A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 張正波;裘娟萍;夏云重
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/01;C12N15/09;C12P17/18;C12R1/465
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

(一)技術領域

本發明涉及一株可生產大觀霉素的新菌株——壯觀鏈霉菌 (Streptomyces?spectabilis)SpLE-16及其應用。

(二)背景技術

大觀霉素(Spectinomycin)，又名壯觀霉素，是上世紀六十年代發現 的一種由壯觀鏈霉菌(Streptomyces?spectabilis)產生的廣譜性氨基環醇類 抗生素，其對多數的革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有活性，并對由這些 細菌引起的感染效果較好。臨床上大觀霉素對肺炎桿菌、流感桿菌、支原 體均有較好的抑制作用，特別是對淋球菌的效果較佳，因此臨床上作為特 效藥用于治療由淋球菌引起的尿路感染、尿道炎、子宮頸炎、直腸炎等疾 病。除此之外，大觀霉素由于具有低毒性和廣譜性，而作為飼料添加劑用 于畜牧業養殖。最近幾年大觀霉素也逐漸地應用于農業病害如由 Xanthomonas菌引起的梨子枯萎病、Xanthomonscitri引起的柑橘癌腫病和 Xanthomonas?oryzae引起的水稻枯葉病的防治。

(三)發明內容

本發明的目的在于提供一種生產大觀霉素的菌株及利用該菌株生產 大觀霉素的方法。

本發明采用的技術方案是：

一種生產大觀霉素的菌株——壯觀鏈霉菌(Streptomyces?spectabilis) SpLE-16，保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：湖北省武漢市珞珈山 武漢大學，430072，保藏日期2010年01月19日，保藏編號CCTCC?No： M?2010018。

所述菌株具有大觀霉素、鏈霉素、乙硫氨酸抗性，所述菌株對大觀霉 素的抗性濃度為5500～6000U/L，鏈霉素的抗性濃度為80～100U/L，乙 硫氨酸的抗性濃度為100～400mg/L。

本發明的大觀霉素生產菌株可以這樣得到：出發菌株經過N-甲基-N’- 硝基-N-亞硝基胍(簡稱‘亞硝基胍’、NTG)、⁶⁰Coγ-射線誘變處理，將誘 變處理后的孢子涂布于不同抗性藥物的抗性平板上，經過繼代培養后獲得 不同藥物的抗性突變菌株。不同抗性突變菌株之間通過多輪的基因組重排 育種，通過菌落對峙法初篩、生物效價法復篩高產的突變菌株。用于篩選 的出發菌株為實驗室篩選保藏的壯觀鏈霉菌(Streptomyces?spectabilis)， 用于篩選的抗性標記藥物有乙硫氨酸、鏈霉素、大觀霉素。

本發明菌株由如下方法獲得：

一、菌株的誘變方法：

(1)出發菌株：壯觀鏈霉菌(Streptomyces?spectabilis)(菌落紅色、 中間皺褶隆起，大觀霉素抗性為1500U/L)。

(2)⁶⁰Coγ-射線誘變：壯觀鏈霉菌原始菌株經自然分離的平板用 1KGy⁶⁰Coγ射線，垂直距離1m照射1h。取誘變后平板一小塊菌體置于含 無菌生理鹽水和玻璃珠的50mL三角瓶中，打散成單細胞懸浮液后稀釋 成10^-1、10^-2、10^-3三個濃度，各取0.2mL涂布于大觀霉素5000、5500、 6000U/L的抗性平板上，倒置平板于28℃培養3d，挑單菌落在同等條件 下進行繼代培養5代后進行復篩抗性穩定的菌株。得到誘變菌株Sp-40， 大觀霉素抗性為4000U/L，在抗性平板上菌落無色，中間凸起無皺褶。