[發明專利]D-氨甲酰水解酶突變體

無效

• 申請號: 201010106806.0
• 申請日: 2010-02-08
• 公開（公告）號: CN102146365A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 楊晟;張大龍;姜衛紅;楊蘊劉;陶榮盛;范文超
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院;中國科學院上海生命科學研究院湖州工業生物技術中心
• 主分類號: C12N9/78
• 分類號: C12N9/78;C12N15/55;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12P13/04
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

1.一種D-氨甲酰水解酶突變體，其特征在于，所含突變包括D-氨甲酰水解酶的第262位和第248位上的氨基酸被取代，且所述突變體具有D-氨甲酰水解酶活性，其熱穩定性高于取代前。

2.如權利要求1所述的突變體，其特征在于，第262位氨基酸是丙氨酸或其保守性取代，第248位是谷氨酰胺或其保守性取代。

3.如權利要求1或2所述的突變體，其特征在于，還含有第263位、第23位和第12位上的氨基酸取代。

4.如權利要求3所述的突變體，其特征在于，第263位是絲氨酸或其保守性取代、第23位是亮氨酸或其保守性取代，第12位是亮氨酸或其保守性取代。

5.如權利要求3所述的突變體，其特征在于，還含有以下位點的取代：第31位、第207位、第242位、第271位、第273位，或它們的組合。

6.如權利要求5所述的突變體，其特征在于，所述組合是：第31位和第207位，第271位和第273位，第242位和第207位，第31位和第242位，第242位和第273位。

7.如權利要求5或6所述的突變體，其特征在于，第31位是亮氨酸或其保守性取代第207位是谷氨酸或其保守性取代，第242位是甘氨酸或其保守性取代，第271位是異亮氨酸、亮氨酸或它們的保守性取代，第273位是賴氨酸、精氨酸、脯氨酸或它們的保守性取代。

8.如權利要求1-7中任一項所述的突變體，其特征在于，它是源于皮氏羅雷斯頓菌CGMCC1596、土壤桿菌KNK712、放射土壤桿菌NRRL?B11291或土壤桿菌IPI-671的D-氨甲酰水解酶的突變體。

9.如權利要求1-8中任一項所述的突變體，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示。

10.一種核酸分子，其編碼權利要求1-9中任一項所述的D-氨甲酰水解酶突變體，或與編碼權利要求1-9中任一項所述的D-氨甲酰水解酶突變體的核酸分子互補。

11.如權利要求10所述的核酸分子，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示，或者是SEQ?ID?NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的互補序列。

12.一種載體，含有權利要求10或11所述的核酸分子。

13.一種宿主細胞，含有權利要求10或11所述的核酸分子。

14.一種生產D-對羥基苯甘氨酸的方法，包括用D-海因酶和權利要求1-9中任一項所述的D-氨甲酰水解酶突變體水解混旋型對羥基苯海因。