[發(fā)明專利]2型糖尿病腎病模型的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010103606.X
• 申請日: 2010-01-29
• 公開（公告）號: CN101766149A
• 公開（公告）日: 2010-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉必成;戴厚永
• 申請（專利權(quán)）人: 東南大學
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A01K67/027;A23K1/18
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 黃雪蘭

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于對糖尿病腎病進行研究的模擬對象，尤其涉及一種2型糖尿病腎病模型制備方法。

背景技術(shù)

糖尿病已日益成為全球的公共健康問題，通常分為2種類型，其中2型糖尿病占整個糖尿病的90％以上。糖尿病腎病是糖尿病常見的慢性并發(fā)癥之一，其發(fā)病機制仍不十分清楚。越來越多的研究證實足細胞損傷在糖尿病腎病發(fā)病機制中起十分重要的作用。足細胞是一高度分化的終末期細胞，現(xiàn)有的小鼠永生系足細胞為體外研究足細胞損傷提供了重要的保證，在體內(nèi)研究中，建立一種盡量模擬人類2型糖尿病腎病發(fā)病過程的動物模型無疑有助于我們深入了解足細胞損傷機制，從而闡明糖尿病腎病其發(fā)病機制，更好地防治糖尿病腎病。

大量的臨床和流行病學資料顯示，胰島素抵抗是2型糖尿病發(fā)病的初始環(huán)節(jié)。是否具有胰島素抵抗特征是2型糖尿病動物模型的關(guān)鍵。目前有關(guān)2型糖尿病腎病早期腎臟損害的研究模型較少，糖尿病模型制備方法分別有自發(fā)性或遺傳性動物模型、化學藥物藥物誘導法、高糖高脂飼料誘導法、手術(shù)切除胰腺法和轉(zhuǎn)基因動物等方法，但這些方法所建立的模型均不能完全反映2型糖尿病的病理及病理生理變化特點。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明提供一種能模仿人類2型糖尿病腎病的發(fā)病經(jīng)過、具備2型糖尿病腎病經(jīng)常合并的肥胖、高血壓、高血脂和胰島素抵抗特點的2型糖尿病腎病動物模型的制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種2型糖尿病腎病模型的制備方法，

步驟1挑選研究大鼠：選擇6周齡雄性SHR大鼠，所述雄性SHR大鼠出生時血壓正常，4周時血壓開始上升，

步驟2高糖高脂飼料喂養(yǎng)誘導胰島素抵抗：對由步驟1選擇的雄性SHR大鼠經(jīng)過適應性喂養(yǎng)一周后，予以高糖高脂飼料喂養(yǎng)2周，檢測體重、血脂、血糖和胰島素濃度，計算穩(wěn)態(tài)模型評價的胰島素抵抗指數(shù)，如果胰島素抵抗指數(shù)≥3.8，則進入步驟3，所述高糖高脂飼料的組分及質(zhì)量配比如下：

豬油10.0％，蔗糖20.0％，膽固醇2.5％，膽酸鹽1.0％，常規(guī)飼料66.5％，

步驟3腹腔注射小劑量的STZ：對胰島素抵抗雄性SHR大鼠禁食12小時后予以小劑量STZ(35mg/kg)一次性腹腔注射，所述小劑量為35mg/kg，72小時測隨機血糖，以血漿葡萄糖≥16.7mmol/L為2型糖尿病造模成功。

本發(fā)明通過高糖高脂喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量STZ注射自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)誘導出具有胰島素抵抗、高血壓、高血脂、蛋白尿和足細胞損傷的新型2型糖尿病腎病模型。

發(fā)明的優(yōu)點：具有操作簡單、經(jīng)濟實用、造模成功率高等特點，而且能模仿人類2型糖尿病腎病的發(fā)病經(jīng)過，具備2型糖尿病腎病經(jīng)常合并的肥胖、高血壓、高血脂和胰島素抵抗等特點，病理學檢查符合2型糖尿病腎病的病理變化。產(chǎn)生此優(yōu)點的原因與以下因素有關(guān)：1.研究對象的選擇。我們選擇6周齡的自發(fā)性高血壓雄性大鼠作為研究對象，而且其本身無明顯原發(fā)性腎臟或腎上腺損傷，雄性SHR大鼠較雌性更容易患病。2.誘導胰島素抵抗：采用高糖聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)2周，結(jié)果其體重增加，無明顯的高血糖，胰島素濃度增加，計算HOMA-IR，結(jié)果顯示成功誘導出胰島素抵抗。3.小劑量STZ單次腹腔注射：在成功誘導出胰島素抵抗后，予以禁食12小時后而不是隨機用小劑量STZ，這樣更容易破壞胰腺部分功能，而不至于破壞全部胰腺功能，造成胰島素相對缺乏，符合2型糖尿病的發(fā)病特點。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的流程圖。

圖2是各組大鼠血壓變化情況圖(*P＜0.01VS?WKY)。

圖3是造模8周后對照組與模型組光鏡病理變化圖(PAS×400)。

圖4是造模8周后掃描電鏡觀察結(jié)果圖(×8,000)。

圖5是造模8周后透射電鏡觀察結(jié)果圖(×15,000)。

具體實施方式

實施例

一種2型糖尿病腎病模型的制備方法，

步驟1挑選研究大鼠：選擇6周齡雄性SHR大鼠，所述雄性SHR大鼠出生時血壓正常，4周時血壓開始上升，

之所以選擇6周齡SHR大鼠其作為本實驗的研究對象，是因為SHR大鼠屬于自發(fā)性高血壓模型，源于東京遠交系Wistar大鼠，高血壓發(fā)生率高，且無明顯原發(fā)性腎臟或腎上腺損傷，同時由于雄性SHR大鼠較雌性更容易患病，其出生時血壓正常，4周時血壓開始上升；