[發(fā)明專利]微生物葉面增效劑

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010103139.0
• 申請(qǐng)日: 2010-01-26
• 公開（公告）號(hào): CN102134168A
• 公開（公告）日: 2011-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張新雄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東莞市保得生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C05F11/08
• 分類號(hào): C05F11/08
• 代理公司: 東莞市華南專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44215
• 代理人: 李玉平

1.微生物葉面增效劑，其特征在于：它的制備工藝流程路線如下：

(1)側(cè)孢芽孢桿菌制劑的制備：菌種——試管斜面菌種培養(yǎng)——搖瓶菌種培養(yǎng)——種子罐深層液體發(fā)酵培養(yǎng)——封閉式固體發(fā)酵箱培養(yǎng)——側(cè)孢芽孢桿菌制劑半成品——檢測(cè)合格；

(2)弗氏鏈霉菌代謝物的制備：菌種——菌種誘變——試管斜面菌種培養(yǎng)——搖瓶菌種培養(yǎng)——種子罐液體發(fā)酵培養(yǎng)——發(fā)酵罐連續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)——后處理——弗氏鏈霉菌代謝物半成品——檢測(cè)合格；

(3)微生物葉面增效肥的制備：

發(fā)酵好的側(cè)孢芽孢桿菌制劑確定活菌數(shù)，配制含量50～100億/克側(cè)孢芽孢桿菌制劑半成品和發(fā)酵好的弗氏鏈霉菌代謝物按重量比2～5％∶98～95％比例混配，然后檢測(cè)、包裝、制得成品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物葉面增效劑，其特征在于：所述側(cè)孢芽孢桿菌的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)方式為以下任選一種：洋菜培養(yǎng)基培養(yǎng)、洋菜斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)、J-肉汁培養(yǎng)液培養(yǎng)、明膠穿刺培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物葉面增效劑，其特征在于：所述側(cè)孢芽孢桿菌制劑的生產(chǎn)工藝為：菌種——斜面菌種培養(yǎng)——搖瓶菌種培養(yǎng)——種子罐深層液體發(fā)酵培養(yǎng)——封閉式固體發(fā)酵箱培養(yǎng)——側(cè)孢芽孢桿菌制劑半成品——檢測(cè)合格，其中，種子罐發(fā)酵過程中的溫度為32±1℃、通氣條件1∶0.3～0.5V/V、發(fā)酵時(shí)間為18～20小時(shí)；封閉式固體發(fā)酵箱培養(yǎng)的條件為：濕度60％～90％、溫度28～35℃、發(fā)酵時(shí)間為96～120小時(shí)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物葉面增效劑，其特征在于：所述弗氏鏈霉菌代謝物的制備工藝：菌種——菌種誘變——試管斜面培養(yǎng)——搖瓶培養(yǎng)——種子罐液體發(fā)酵培養(yǎng)——發(fā)酵罐連續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)——后處理——弗氏鏈霉菌代謝物半成品——檢測(cè)合格；其中，種子罐液體發(fā)酵培養(yǎng)中的發(fā)酵溫度為28±1℃、通氣條件1∶0.5～0.8V/V、發(fā)酵時(shí)間為20～24小時(shí)；發(fā)酵罐連續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)的條件為，發(fā)酵溫度為28±1℃、通氣條件1∶0.8～1.2V/V、發(fā)酵時(shí)間為40～48小時(shí)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物葉面增效劑，其特征在于：弗氏鏈霉菌的斜面培養(yǎng)基為以下任選一種：察氏培養(yǎng)基、葡萄糖天冬素培養(yǎng)基、甘油天冬素培養(yǎng)基、無機(jī)鹽淀粉培養(yǎng)基、ISP-2培養(yǎng)基、燕麥粉培養(yǎng)基、高氏一號(hào)培養(yǎng)基、桑塔氏培養(yǎng)基。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物葉面增效劑，其特征在于：所述工藝(2)弗氏鏈霉菌代謝物的制備中，菌種誘變方法如下：

(1)紫外線誘變

30瓦的紫外燈預(yù)熱30分鐘后，把盛有70ml用生理鹽水制備的指標(biāo)為5.7×10⁷個(gè)/ml的孢子懸液的玻璃缸置于紫外燈管30厘米處，玻璃缸下面放置磁力攪拌器，同時(shí)把無菌的轉(zhuǎn)子放到玻璃缸中；開動(dòng)攪拌器，開啟紫外燈并記時(shí)，分別在0、5、10、15、20、30、40分鐘定時(shí)取樣10ml置于無菌離心管中備用；

(2)亞硝基胍誘變

稱取一定量的亞硝基胍，用丙酮助溶，用pH6.0的磷酸鹽緩沖液配制成20mg/ml的亞硝基胍母液，丙酮體積與緩沖液體積之比為1∶9；

在70ml用pH6.0的磷酸鹽緩沖液制備成孢子數(shù)為5.7×10⁷個(gè)/ml的孢子懸液，在孢子懸液中加7ml亞硝基胍母液，置200RPM、28℃搖床處理；分別在作用0、5、10、15、20、25、30分鐘后定時(shí)取樣10ml于無菌離心管中3000RPM10分鐘離心，生理鹽水洗滌三次，最后用10ml生理鹽水懸浮備用；

(3)硫酸二乙酯誘變

取1ml硫酸二乙酯用1ml丙酮助溶，加入70ml用pH7.0的磷酸鹽緩沖液制備成的孢子數(shù)為5.7×10⁷個(gè)/ml的孢子懸液，置200RPM?28℃搖床處理；0、5、10、15、20、25、30分鐘定時(shí)取樣10ml于離心管中，每個(gè)離心管加入0.6ml36％的硫代硫酸鈉終止反應(yīng)，3000RPM10分鐘離心，生理鹽水洗滌三次，最后用10ml生理鹽水懸浮備用和抑菌物質(zhì)的高產(chǎn)菌多株；這些高產(chǎn)菌的抑菌活性分別是原始菌株的2-5倍。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物葉面增效劑，其特征在于：所述制備工藝(2)弗氏鏈霉菌代謝物的制備中，其后處理過程為發(fā)酵液通過固液分離，固體部分采用閃蒸法干燥，液體部分采用噴霧法干燥，合并干粉為弗氏鏈霉菌代謝物。