[發明專利]紫外分光光度計測定嘌呤的方法

無效

• 申請號: 201010102513.5
• 申請日: 2010-01-29
• 公開（公告）號: CN101776589A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發明（設計）人: 單安山;喬國華
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務所有限責任公司 23101
• 代理人: 崔東輝

1.一種紫外分光光度計測定嘌呤的方法，其特征在于：步驟如下：

步驟一：準確稱取0.5克用凍干機充分干燥的食糜樣本，置于 25ml具塞帶刻度的試管內，所述的樣本必須是干燥的，否則會導致 核酸水解不完全；

步驟二：加入2.5ml??1M?HClO₄，緊蓋瓶口，然后將其放在90～95 ℃的恒溫水浴內培養1小時，此時樣本即炭化，形成黑色硬結，將硬 結破碎，以利反應完全；

步驟三：再加入17.5ml?0.0285M?NH₄H₂PO₄，充分搖動，緊蓋 瓶口，重新置于90～95℃的恒溫水浴內培養10～15分鐘，然后通過 Whatman4號濾紙過濾，此時濾液的pH值為2左右；

步驟四：取0.5ml濾液轉移到容積為15ml的離心管內，分別加 入0.5ml?0.4M?AgNO₃和9ml?0.2M?NH₄H₂PO₄甲種pH緩沖液，然后置 于暗處至少30分鐘，在5℃下將其放置過夜，提高分析的準確度；

步驟五：于4000rpm離心15分鐘，然后小心地棄去上清液，不 要攪動瓶底的沉淀物；

步驟六：用pH為2的蒸餾水洗離心分離所得沉淀物一次，用與 步驟五同樣的方法離心，棄去上清液；

步驟七：加入10ml?0.5N的鹽酸溶液，充分搖動，使其與沉淀物 混勻為止；

步驟八：用具塞密封離心管，放在90～95℃的恒溫水浴內培養30 分鐘；

步驟九：用紫外分光光度計于260nm處比色，測得的嘌呤濃度 用RNA當量表示；

步驟十：酵母RNA標準曲線的制定：準確稱取0.05，0.10，0.15， 0.20，0.25，0.30，0.40，0.50克酵母RNA，分別置于8個25ml的具 塞帶刻度的試管內，按上述分析樣本內嘌呤含量的操作方法進行處 理，最后于260nm處比色；

步驟十一：數據統計分析采用SAS?2003ANOVA進行多重比較。