[發(fā)明專利]環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢測(cè)微小亞歷山大藻的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010102114.9
• 申請(qǐng)日: 2010-01-28
• 公開（公告）號(hào): CN101838690A
• 公開（公告）日: 2010-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張鳳英;馬凌波;蔣科技;馬春艷;石彥紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 31233
• 代理人: 黃志達(dá);謝文凱

1.一種環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢微小亞歷山大藻的方法，包括：

(1)赤潮藻類的基因組DNA提取

(2)LAMP擴(kuò)增引物

兩個(gè)外引物：

Am-F3：CTTTGTGAGCTGTGGTGG；

Am-B3：TTCTTCATCATCAATTGAGCTAA；

兩個(gè)內(nèi)引物：

Am-FIP：CAGCAGCATGAAAGCGCTTG-GTTCTTCATCATTTGCTCGTG；

Am-BIP：CGTTTGTCCTGTGACTGACTC-GACATTCATTGCAAAAACACATT；

(3)LAMP擴(kuò)增反應(yīng)體系

(4)LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢微小亞歷山大藻的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的LAMP擴(kuò)增反應(yīng)體系所用試劑為：2.5uL?10×buffer，兩個(gè)內(nèi)引物Am-FIP和Am-BIP的終濃度均為1.6μM，兩個(gè)外引物Am-F3和Am-B3的終濃度均為0.2μM，另外還包括6mM?MgSO4，0.6mM?dNTP，0.6M?Betaine(Sigma-Aldrich)，8U?Bst?DNA聚合酶，1uL?DNA模板。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢微小亞歷山大藻的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的LAMP擴(kuò)增反應(yīng)體系的條件為：反應(yīng)溫度65℃，反應(yīng)時(shí)間60min，最后于85℃保持3min終止反應(yīng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢微小亞歷山大藻的方法，其特征在于：所述步驟(4)中的LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)，電泳檢測(cè)可見陽(yáng)性反應(yīng)出現(xiàn)梯狀條帶，陰性反應(yīng)沒有條帶的出現(xiàn)，肉眼觀察可見陽(yáng)性反應(yīng)管內(nèi)有大量白色沉淀產(chǎn)生；或加2μL100×SYBR?Green?I于反應(yīng)管中，反應(yīng)管呈現(xiàn)綠色為陽(yáng)性，反應(yīng)管內(nèi)顏色不變?yōu)殛幮浴?/p>