[發明專利]一種豬圓環病毒II型疫苗制備

無效

• 申請號: 201010102032.4
• 申請日: 2010-01-28
• 公開（公告）號: CN101773667A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發明（設計）人: 張許科;孫進忠;喬榮岑;陶家權;彭伍平;張海洋;習向鋒;李三
• 申請（專利權）人: 洛陽普萊柯生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/20;C12N7/00
• 代理公司: 洛陽明律專利代理事務所 41118
• 代理人: 盧洪方

1.一種豬圓環病毒II型疫苗制備方法，包括下列操作步驟：

(1)將制苗用宿主細胞接種到含有生長用培養液與微載體的載體罐內，并將上述細胞與微載體混合均勻，使細胞貼附在微載體上；在適當培養環境下，提供上述細胞生長足夠的養分及氣體環境，使細胞在上述微載體上生長至接種濃度的5～40倍；

(2)將細胞生長用培養液更換為維持用培養液，并同步加入豬圓環病毒II型種毒，先使其吸附在細胞上，然后進行培養，增殖病毒；

(3)培養24小時后將細胞維持液棄去，接種病毒的細胞以0.01mol/L的PBS充分洗滌，加入D-氨基葡萄糖孵育30min；

(4)棄去D-氨基葡萄糖，將細胞以0.01mol/L、pH為7.4的PBS充分洗滌，加入細胞維持液繼續培養細胞；

(5)連續培養10天后，收獲病毒液，于-20℃凍融兩次，得到豬圓環病毒II型病毒液；

(6)病毒液經檢驗合格后，加入甲醛滅活，滅活后的豬圓環病毒II型加入常規油性佐劑或雙相佐劑，攪拌混勻，制得油乳劑疫苗或雙相疫苗。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的宿主細胞為可增殖豬圓環病毒病毒II型的細胞系。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于細胞、病毒的增殖方法采用潮汐式微載體懸浮培養方式。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于步驟(1)、(2)中培養細胞時啟動貼附程序4h后換成培養程序，細胞貼附程序參數為：up：2300～2700mL/min?hold40～75s、Down：2300～2700mL/min?hold?30～60s、設定最大換液量18500ml；細胞培養程序參數為：up：1700～2100mL/min?hold?40～75s、Down1700～2100mL/min?hold?40～75s、設定最大換液量18000ml。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于接種病毒時啟動病毒吸附程序4h后換成病毒增殖程序，病毒吸附程序參數為：up：1400～1800mL/min?hold40～75s、Down：1400～1800mL/min?hold?30～60s、設定最大換液量18500ml；病毒增殖程序參數為：up：900～1200mL/min?hold?40～75s、Down900～1200mL/min?hold?40～75s、設定最大換液量18000ml。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述的微載體為聚酯纖維。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于步驟(1)中所述微載體用量為每500ml培養液添加5.5g微載體，細胞的初始接種量為1.4～2.6×10⁷cells/g微載體。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于細胞培養的環境為溫度37℃，CO₂濃度為5％，培養液pH值為7.0～7.6。

9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于步驟(3)中所述接種病毒時細胞密度為1.1～2.0×10⁸cells/g微載體。

10.根據權利要求5所述的方法，其特征在于步驟(3)中所述接種病毒時按病毒感染復數為0.01～1的比例。