[發明專利]化學法-酶法制備1-脫氧-D-木酮糖5-磷酸的方法無效
| 申請號： | 201010100974.9 | 申請日： | 2010-01-22 |
| 公開（公告）號： | CN101775421A | 公開（公告）日： | 2010-07-14 |
| 發明（設計）人： | 高文運;田潔;廖娟;李恒;王學嬌;戴少波 | 申請（專利權）人： | 西北大學 |
| 主分類號： | C12P19/02 | 分類號： | C12P19/02 |
| 代理公司： | 西安智邦專利商標代理有限公司 61211 | 代理人： | 徐平 |
| 地址： | 710069陜*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 化學 法制 脫氧 木酮糖 磷酸 方法 | ||
1.化學法-酶法制備1-脫氧-D-木酮糖5-磷酸的方法，其特征在于，該方 法包括以下步驟
取148mg?Na2HPO4于15mL離心管中，加入800μl超純水使之溶解，再 加入0.5mmol?rac-縮水甘油或0.25mmol?R-縮水甘油，100℃水浴， 反應3h；反應結束后，待離心管冷卻至室溫后，調pH至7.5，加入過氧 化氫酶?180units，L-甘油磷酸氧化酶?3units，丙酮酸鈉55mg，磷 酸三糖異構化酶25units，輔羧酶2mM，MgCl2?10mM，β-巰基乙醇?5m M，1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶500μg，總反應體積為1mL，37℃反 應12小時；反應過程中，用紙色譜法檢測反應進行的程度，介質為實 驗室常用定性濾紙，展開劑為1M乙酸銨︰99%乙醇︰EDTA-Na2=70︰30 ︰1（v/v/v），顯色劑為10%的硫酸乙二胺鹽水溶液；反應完成后，4 ℃下陰離子交換劑純化產物1-脫氧-D-木酮糖5-磷酸，流動相為0.05- 0.65M甲酸銨溶液，pH8.0，流速2.5mL/min，低濃度到高濃度線性梯度 洗脫，紙色譜檢測；將含有1-脫氧-D-木酮糖5-磷酸部分合并后用陽離 子交換劑脫鹽，收集洗脫液減壓濃縮得到油狀物質，即得1-脫氧-D-木 酮糖5-磷酸產品，低溫保存；
所述陰離子交換劑采用DEAE?Sephadex?A-25，陽離子交換劑采用H型 的Dowex?50w×8?樹脂。
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