[發明專利]對基于量子點的熒光共振能量轉移進行高靈敏度檢測的方法

無效

• 申請號: 201010100529.2
• 申請日: 2010-01-22
• 公開（公告）號: CN101788479A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 趙元弟;李永強;關麗云;駱清銘
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N27/447
• 代理公司: 華中科技大學專利中心 42201
• 代理人: 夏惠忠

1.一種對基于量子點的熒光共振能量轉移進行高靈敏度檢測的方法，其步驟為：

(1)利用紫外分光光度計和熒光分光光度計分別對待測的熒光共振能量轉移中所采用的供體和受體的吸收光譜和熒光光譜進行測量，根據測得的供體的吸收光譜選擇激發光源和濾光片，要求激發光的波長落在供體的吸收光譜范圍內；

(2)分別配制待測的熒光共振能量轉移中所采用的供體溶液和受體溶液，將二者以任意濃度和任意比例混合得到供體和受體的混合溶液，將此混合溶液進行毛細管電泳，在毛細管電泳中，選擇毛細管的某一固定位置作為檢測窗口，在檢測窗口處用所選擇的激發光對經過此處的電泳對象進行激發，并用在熒光信號采集裝置上設置的兩個信號通道分別對供體和受體的熒光強度信號進行實時測量，這兩個信號通道的檢測波長分別與供體和受體的熒光發射波長(供體和受體的熒光發射波長由其熒光光譜獲得)相同，將得到的數據作圖即得到分別表示供體和受體的熒光強度信號隨其電泳遷移時間的變化情況的毛細管電泳圖譜，圖譜上的峰值即為不同存在形式的供體和受體的熒光強度信號；當混合溶液中供體相對于受體過量時，供體信號通道中得到的毛細管電泳圖譜上得到兩個峰值，分別為未參加熒光共振能量轉移的過量的供體的熒光強度信號F₁和以供受體結合物形式存在的供體的熒光強度信號F₂，與此同時在受體通道中得到的毛細管電泳圖譜上只得到一個峰值，為以供受體結合物形式存在的受體的熒光強度信號F₄，且F₂和F₄所對應的電泳遷移時間相同；當混合溶液中受體相對于供體過量時，在受體信號通道中得到的毛細管圖譜上得到兩個峰值，分別為未參加熒光共振能量轉移的過量的受體的熒光強度信號F₃和以供受體結合物形式存在的受體的熒光強度信號F₄，與此同時在供體通道中得到的毛細管電泳圖譜上只得到一個峰值，為以供受體結合物形式存在的供體的熒光信號F₂，且F₂和F₄所對應的電泳遷移時間相同；

(3)用與步驟(2)相同的電泳裝置和電泳條件，將供體溶液單獨進行毛細管電泳，其中供體的濃度與步驟(2)混合溶液中所含供體的濃度相同，電泳完成后在供體通道中得到的毛細管電泳圖譜上得到一個峰值，為無受體存在時單獨供體的熒光強度信號F₅；

(4)用與步驟(2)相同的電泳裝置和電泳條件，將受體溶液單獨進行毛細管電泳，其中受體的濃度與步驟(2)混合溶液中所含受體的濃度相同，電泳完成后在受體通道中得到的毛細管電泳圖譜上得到一個峰值，為無供體存在時單獨受體的熒光強度信號F₆；

(5)若在供體存在時受體的熒光強度信號F₃+F₄大于無供體存在時單獨受體的熒光強度信號F₆，說明在步驟(2)的混合溶液中發生了熒光共振能量轉移，此時利用公式a計算得到熒光共振能量轉移效率E，E=1-F2F5-F1]]>公式(a)。