[發明專利]一種直接進行半定量分析的免疫膠體金屬檢測技術及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201010100433.6
• 申請日: 2010-01-25
• 公開（公告）號: CN102135535A
• 公開（公告）日: 2011-07-27
• 發明（設計）人: 劉鳳鳴
• 申請（專利權）人: 劉鳳鳴
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/545;G01N33/532
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1.一種免疫膠體金屬檢測技術，其特征在于所述的檢測技術是一種將待測物樣品與已知濃度的待測物標準比對品在同一反應體系下進行反應的直接檢測待測物含量的半定量膠體金屬免疫層析檢測技術。

2.根據權利要求1所述的檢測技術，其特征在于所述的檢測技術由固相膜、支撐片、顯色劑、點樣器、標準比對品組成，其中固相膜具有明顯的蛋白質結合特性，顯色劑為膠體金屬溶液標記的能與待測物特異性結合的抗體或抗原，點樣器為能將微量待測樣品轉移至固相膜的移液裝置，支撐片用于固定固相膜和其它檢測材料，標準比對品為已知濃度的待測物及其具有相同免疫特性的衍生物。

3.根據權利要求1所述的檢測技術，其特征在于所述的檢測技術包括以下步驟：

1)將一種或一種以上的不同濃度的標準比對品預先固定至固相膜上；

2)用膠體金屬溶液標記能與待測物特異性結合的抗體或抗原，制備顯色劑；

3)檢測時用點樣器直接將待測樣品點樣轉移到固相膜上，干燥固定；

4)用特異性顯色劑對標準比對品和待檢樣品中的待測物在同一反應體系下進行特異性著色；

5)將待檢樣品中待測物的顯色強度與標準比對品的顯色強度進行比較，找出與待檢樣品中待測物的顯色強度相近的標準比對品的濃度區間，進而進行待測樣品中待測物含量的半定量分析。

4.根據權利要求1所述的檢測技術，其特征在于所述的固相膜包括硝酸纖維素膜、PVDF膜、尼龍膜、DEAE纖維素膜。

5.根據權利要求1所述的檢測技術，其特征在于所述的膠體金屬溶液包括膠體金、膠體硒、膠體銀、膠體銅、膠體鐵。

6.根據權利要求1所述的檢測技術為膠體金屬免疫層析法。

7.根據權利要求3所述的檢測技術，其特征在于所述的檢測技術為免疫層析法，由包括支撐片、固相膜、顯色劑墊、樣品墊、點樣器、標準比對品、吸水墊、上樣緩沖液、移液管組成，其中在支撐底片上依次裝有樣品墊、顯色劑墊、固相膜、吸水墊，包括以下步驟：

1)將一種或一種以上的不同濃度的標準比對品預先固定至固相膜上；

2)用膠體金屬溶液標記能與待測物特異性結合的抗體或抗原，制備顯色劑；

3)將標記后的顯色劑噴涂至顯色劑墊上，干燥；

4)檢測時用點樣器直接將待測樣品點樣轉移到固相膜上，干燥固定；

5)在樣品墊加上樣緩沖液，使其向前泳動帶動顯色劑流經固相膜進入吸水墊，此時形成特異性顯色劑使標準比對品和待檢樣品中的待測物在同一反應體系下進行特異性著色反應；

6)將待檢樣品中待測物的顯色強度與標準比對品的顯色強度進行比較，找出與待檢樣品中待測物的顯色強度相近的標準比對品的濃度區間，進而進行待測樣品中待測物含量的辦定量分析。

8.根據權利要求1所述的檢測技術，其特征在于聯合使用多種膠體金屬顯色信號放大技術提高檢測靈敏度，包括免疫金銀染色放大技術、生物素-親合素放大技術、生物素-鏈霉親合素放大技術、第二抗體結合放大技術。

9.權利要求1所述的檢測技術在膠體金屬免疫層析檢測技術產品開發中的用途。