[發明專利]圓環病毒基因工程黏膜免疫亞單位疫苗的制備及其應用

無效

• 申請號: 201010100219.0
• 申請日: 2010-01-25
• 公開（公告）號: CN102134278A
• 公開（公告）日: 2011-07-27
• 發明（設計）人: 李殿明;蒲勤;李毅;趙明;田春輝;齊春梅;顧富香
• 申請（專利權）人: 青島寶麥德生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12P21/02;A61K39/12;A61P31/20
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技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明涉及用于黏膜免疫的融合蛋白，用于預防豬圓環病毒，其由圓環病毒PCV2主要膜蛋白capsid?protein的亞單位、大腸桿菌不耐熱毒素B亞單位、T細胞抗原表位及純化標簽序列組成，及其制備方法及應用。

背景技術

豬圓環病毒2型(PCV-2)是1991年加拿大的Harding?J和Clark?E等學者最早發現。仔豬斷奶后多系統衰竭綜合征(PMWS)的主要病原是PCV-2，此外，豬皮炎與腎炎綜合征、增生性壞死性肺炎、豬呼吸道綜合征、繁殖障礙、先天性顫抖等疫病都與PCV-2相關聯。PCV2及其相關的豬病死亡率10％～30％不等，較嚴重的豬場在暴發本病時死淘率高達40％，給養豬業造成嚴重的經濟損失。豬對PCV2具有較強的易感性，感染豬可自鼻液、糞便等廢物中排出病毒，經口腔、呼吸道途徑感染不同年齡的豬。懷孕母豬感染PCV2后，可經胎盤垂直傳播感染仔豬。公豬精液可能是另一種傳播途徑。用PCV2人工感染試驗豬后，其他未接種豬的同居感染率是100％，這說明該病毒可水平傳播。豬在不同豬群間的移動是該病毒的主要傳播途徑，也可通過被污染的衣服和設備進行傳播。

豬圓環病毒2型(Porcine?circovirus?type?2，PCV2)為無囊膜的單股負鏈DNA病毒，屬圓環病毒科(Circoviridae)成員。其基因組為單股環狀DNA。豬圓環病毒(Porcine?circovirus，PCV)為圓環病毒科圓、環病毒屬成員，可分為不致病的圓環病毒1型(PCV-1)和致病的圓環病毒2型(PCV-2)兩個血清型。

國內目前的PCV2疫苗都是全病毒滅活疫苗，有很好的免疫原性。其他商品化的PCV2滅活疫苗直至到2006年才正式獲得許可證。2006年在富道動物公司的PCV2疫苗(Suvaxyn)在美國第1個獲得了完整的許可證。2007年9月，梅里亞PCV2滅活疫苗首次在歐洲獲得批準文號。全球一共有5家商品化的PCV2疫苗。其中梅里?亞研發的PCV2疫苗(Circovace)為全病毒滅活苗，適用于母豬免疫；勃林格殷格翰動物保健公司的PCV2疫苗(CircoFlex)和英特威/先靈葆雅動物保健公司的PCV2疫苗(Circumvent)屬于亞單位苗；富道動物保健公司的PCV2疫苗(Suvaxyn)則屬于嵌合病毒滅活苗。另外還有一家韓國的公司亦擁有該疫苗。國內新型疫苗的研制比國外稍慢一些。滅活疫苗在使用中都存在病毒重組形成新毒株的可能，因此有一定的潛在危險；在亞單位疫苗方面，主要是將PCV2基因組中編碼免疫原性蛋白的OR?F2片段插入到昆蟲桿狀病毒中，通過培養昆蟲桿狀病毒即可快速、大量獲得具備免疫原性的PCV2核衣殼蛋白，再將其制備成疫苗，大量田間試驗表明該類疫苗可為仔豬提供良好的免疫保護(勃林格殷格翰動物保健公司的PCV2疫苗CircoFlex和英特威/先靈葆雅動物保健公司的PCV2疫苗Circumvent)：另一類是嵌合病毒滅活苗，原理是用PCV-2的ORF2片段置換不致病的PCV1中的ORF2片段，即獲得了PCV1-PCV2嵌合病毒，具有與PCV-2類似的免疫原性(富道動物保健公司)，試驗中發現活苗中的嵌合病毒易被母源抗體中和，遂將其滅活制得PCV-1-PCV-2嵌合滅活苗。迄今，多批試驗表明，嵌合病毒滅活苗可為豬群提供較好的免疫保護，特別在抑制病毒、減少病毒血癥方面具有顯著的優勢。

近年興起的黏膜免疫，不僅可以產生很強的抗體應答，而且還能產生較好的細胞免疫效果。黏膜免疫需要有黏膜佐劑分子，已經證實霍亂毒素B亞單位(本文簡稱為CTB)、大腸桿菌不耐熱毒素B亞單位(本文簡稱為LTB)均是良好的佐劑分子(Lycke?N，European?J.of?Immunol，1992；22：2277-2281)。此外，Blanco的研究發現，含有T細胞表位的多肽能增強Th細胞的活性，并協同誘導機體產生抗病毒抗體(Blanco?E，J?Virol.2001；75(7)：3164-74)。

目前，尚沒有見到針對PCV的黏膜免疫疫苗，為了有效預防圓環病毒，人們迫切需要一種新型、高效的疫苗來預防圓環病毒。本發明提供了提供了一種新的能用于黏膜免疫的融合蛋白及其疫苗組合物，其能預防圓環病毒的感染。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種新的能用于黏膜免疫的融合蛋白及其疫苗組合物，其能預防圓環病毒的感染。本發明還提供了含有所述融合蛋白的藥物組合物，如疫苗組合物。此外，本發明還提供了編碼所述融合蛋白的多核苷酸以及制備該?融合蛋白的方法等。