[發明專利]鮭魚腎桿菌實時熒光RT-PCR檢測方法和試劑盒

無效

• 申請號: 201010042634.5
• 申請日: 2010-01-04
• 公開（公告）號: CN102115786A
• 公開（公告）日: 2011-07-06
• 發明（設計）人: 何俊強;劉宗曉;史秀杰;劉葒;蘭文升;高隆英
• 申請（專利權）人: 深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/64
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 羅瑤

1.鮭魚腎桿菌(Renibacterium?salmoninarum)的實時熒光RT-PCR檢測方法，所述方法包括利用特異性探針和引物對，以細菌DNA為模板進行實時熒光RT-PCR反應，其特征在于：所述引物對分別含有Seq?ID?No.1和Seq?ID?No.2所示的序列；

Seq?ID?No.1：5’-CCG?AAG?AGC?CCA?CCA?ATG?AC-3’

Seq?ID?No.2：5’-GAC?TTA?GAC?GAC?GCC?GTA?GC-3’

所述探針為能與鮭魚腎桿菌的基因組DNA位于所述引物對之間的序列相同或互補、且長度為15～30bp的寡核苷酸序列，并且所述探針的5’端和3’端分別標記有熒光報告基團和熒光淬滅基團。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述探針含有SeqID?No.3所示的序列，

Seq?ID?No.3：5’-CGG?ATT?GCC?GTC?GCC?GCA?GC-3’。

3.根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于：所述探針5’端標記的熒光報告基團為FAM，3’端標記的熒光淬滅基團為TAMRA。

4.根據權利要求1～3任意一項所述的檢測方法，其特征在于：所述RT-PCR反應的引物終濃度為0.9～1.1μmol/L，探針終濃度為0.09～0.11μmol/L。

5.根據權利要求1～4任意一項所述的檢測方法，其特征在于：所述RT-PCR的反應的退火溫度為53℃～57℃。

6.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于：所述RT-PCR的反應條件包括：50℃，2min；94℃，10min；40循環：94℃20s，55℃40s。

7.鮭魚腎桿菌(Renibacterium?salmoninarum)的檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒含有能擴增出鮭魚腎桿菌的基因片段的引物對，所述引物對分別含有Seq?ID?No.1和Seq?ID?No.2所示的序列，

Seq?ID?No.1：5’-CCG?AAG?AGC?CCA?CCA?ATG?AC-3’

Seq?ID?No.2：5’-GAC?TTA?GAC?GAC?GCC?GTA?GC-3’。

8.根據權利要求7所述的檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測試劑盒用于實時熒光RT-PCR檢測，并且所述試劑盒還含有能與鮭魚腎桿菌的基因組DNA位于所述引物對之間的序列相同或互補、且長度為15～30bp的寡核苷酸探針，并且所述探針的5’端和3’端分別標記有熒光報告基團和熒光淬滅基團。

9.根據權利要求8所述的檢測試劑盒，其特征在于：所述探針含有Seq?ID?No.3所示的序列，

Seq?ID?No.3：5’-CGG?ATT?GCC?GTC?GCC?GCA?GC-3’。

10.根據權利要求9所述的檢測試劑盒，其特征在于：所述探針5’端標記的熒光報告基團為FAM，3’端標記的熒光淬滅基團為TAMRA。