[發明專利]組織培養鐵皮石斛類原球莖的方法

無效

• 申請號: 201010000764.2
• 申請日: 2010-01-19
• 公開（公告）號: CN101715733A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發明（設計）人: 賈景明
• 申請（專利權）人: 煙臺匯鵬生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體是一種組織培養鐵皮石斛類原球莖的方法。

背景技術

鐵皮石斛(Dendrobium?candidum?Wall.ex?Lindl.)為蘭科(Orchidaceae)石斛屬(Dendrobium)多年生附生草本植物，因老莖莖節處呈褐色，又名黑節草，是一種集觀賞和藥用于一身的名貴珍稀草本植物，具有獨特的藥用價值，為石斛之極品。石斛是我國古文獻中最早記載的蘭科植物之一，其性味甘淡、微咸，性屬清潤，清中有補，補中有清。早在東漢時期的《神農本草經》中已記載石斛“主傷中、除痹、下氣、補五臟虛勞羸瘦、強陰、久服厚腸胃”。成書于一千多年前的道家醫學經典《道藏》將鐵皮石斛列為“中華九大仙草”之首，為歷代帝王夢寐以求的寶物，素有“千金草”之稱，馳名中外，被國際藥用植物界稱為“藥界大熊貓”，民間稱其為“救命仙草”。現代藥理學研究表明，石斛多糖具有增強T細胞及巨噬細胞免疫活性的作用，是一種前景可喜的中藥免疫增強劑，并具有抗腫瘤、降血糖、抗氧化、抗誘變等作用，受到國內外學者的高度重視。

鐵皮石斛常附生于樹木或巖石上，植株比較矮小，生長發育緩慢，葉片面積小、光合面積小、強度低，尤其是種子極小，胚具后熟現象，因此自然條件下種子難以萌發(萌發率低于5％)。在通常的栽培條件下，鐵皮石斛由種子到開花需要3～4年，常需與某些真菌共生才能萌發，很難有實生苗栽培。而傳統的分株扦插等無性繁殖方式的成活率低、生長速度慢、繁殖率低，加之近年來人們對野生鐵皮石斛資源的掠奪式采挖，其生境被嚴重破壞，致使野生鐵皮石斛瀕臨滅絕。

國內外學者開展了對野生鐵皮石斛全面的研究，包括化學成分，藥理活性，人工種植等方面的研究。而鐵皮石斛的培養主要集中在愈傷組織誘導、基本培養條件篩選和理化因子的考查等方面。鐵皮石斛試管苗的繁殖一般要經過類原球莖(protocorm-like?bodies，即PLBs)階段，而類原球莖實質上是正在生長分化的體細胞胚胎，具有與原植株相同的物質代謝和形態發育潛能。鑒于此，人們提出用類原球莖代替原植株成為新藥源的可能性。然而，已有的研究結果表明，從鐵皮石斛不同部位誘導出類原球莖的研究還存在誘導率低、分化快和褐變等問題尚沒有解決，目前還沒有找到一個切實有效地培養技術用以解決鐵皮石斛類原球莖誘導和增殖以及代謝產物控制中存在的疑點和難點，從而影響了鐵皮石斛的深入研究和開發。

天然鐵皮石斛已作為瀕臨滅絕的植物種受到世界以及我國政府的重點保護，嚴禁采摘。為此研究鐵皮石斛類原球莖的培養，實現產業化顯得十分重要。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中的不足，提供一種繁殖速度快，石斛多糖含量高的組織培養鐵皮石斛類原球莖的方法。

本發明的目的是這樣實現的：一種組織培養鐵皮石斛類原球莖的方法，它包括如下步驟：

a、植物體的選擇及無菌處理：

選擇6～8月份生長的鐵皮石斛野生新鮮植株，除去根和葉進行清洗和無菌處理，選取實生苗的幼莖，將幼莖剪成0.3～0.5cm²大小鐵皮石斛組織；

b、組織誘導培養：

將經過無菌處理后的鐵皮石斛組織在誘導培養基中進行組織誘導培養，培養周期：10～24天，培養溫度：10～30℃，光照時間：1～24小時/天，光照強度：0～100μmol/m²·s；所述的誘導培養基為：MS培養基+蔗糖0～50g/L+瓊脂0～10g/L+α-萘乙酸0.1～5.0mg/L+6-芐氨基嘌呤0.1～5.0mg/L，pH值為5.0～7.0；

c、大規模培養：

將誘導出的鐵皮石斛類原球莖在大規模培養基中進行大規模培養，培養周期：10～24天，培養溫度：10～30℃，光照時間：0～24小時/天，光照強度：0～100μmol/m²·s；所述的大規模培養基為：MS培養基+蔗糖20～50g/L+α-萘乙酸0.1～5.0mg/L+6-芐氨基嘌呤0.1～5.0mg/L，pH值為5.0～7.0。

作為本發明組織培養鐵皮石斛類原球莖的方法更優化的技術方案，對培養基的配方比例和培養條件進行優化選擇。