[發明專利]脂質酰基轉移酶蛋白及其制備方法

無效

• 申請號: 200980162945.0
• 申請日: 2009-10-15
• 公開（公告）號: CN102656264A
• 公開（公告）日: 2012-09-05
• 發明（設計）人: 詹妮·布倫斯特德;延斯·弗里斯貝克·瑟倫森;約恩·博爾奇·瑟;夏洛特·約翰森·韋澤爾;伯吉特·Φ·維特席本;喬恩·D·米克凱爾森;夏洛特·霍斯曼斯·波爾森;萊恩·B·詹森;洛寧·B·米勒;莫藤·K·拉爾森;賴克·H·洛倫岑;C·R·索達爾;瑪格麗特·A·切爾溫;理查德·R·博特
• 申請（專利權）人: 丹尼斯科公司
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N15/75;C12N1/21
• 代理公司: 隆天國際知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 吳小瑛;任曉華

1.制備變體脂質酰基轉移酶的方法，所述方法包括在宿主生物中表達與編碼親本脂質酰基轉移酶的核苷酸序列具有至少90%同一性且包含至少一個修飾的核苷酸序列，所述修飾的位置對應于在所編碼的氨基酸序列中位于第27、31、85、86、122、119、120、122、201、235、232、236、245、232、235和/或236位的氨基酸，其中所述位置編號定義為當基于初級或三級結構比對時，對應于本文SEQ?ID?No.6所示的酶相同位置的位置。

2.如權利要求1所述的方法，其中，至少一個修飾在位于所述峽谷區中的氨基酸殘基中，并且選自一個或多個以下位置：27、31、85、86、119和/或120。

3.如權利要求2所述的方法，其中，所述峽谷區中的至少一個修飾與所述峽谷區之外的進一步的修飾組合。

4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，所述脂質酰基轉移酶可進一步包括位于一個或多個以下位置的至少一個進一步的修飾：23、81、82、289、229、227、233、33、207和/或130，其中所述位置編號定義為當基于初級或三級結構比對時，對應于本文SEQ?ID?No.6所示的酶相同位置的位置。

5.如前述任一項權利要求所述的方法，其中，所述至少一個修飾選自以下組成的組：L31Q、H、N、T、F、Y或C(優選L31Q)；M27R、G、H、K、Y、D、N、V、C、Q、L、E、S或F(優選M27V)；V85H、R、D或E；I86R、Y、S、V、I、A、T、M、F、C或L(優選I86S或A)；A119T或I；Y120K或E；W122S、L或A(優選W122L)；E201R；Q245S；F235A或V；W232G或S；和/或A236G或E。

6.一種方法，其包括改變底物鏈長特異性決定片段的長度，從而產生相對于親本酶具有改變的底物特異性的變體脂質酰基轉移酶，其中，所述底物鏈長特異性決定片段緊鄰于所述親本酶的催化三聯體(優選所述催化三聯體的Asp殘基)的N-末端，所述親本酶與本文SEQ?ID?No.6或16所示的來自殺鮭氣單胞菌的脂質酰基轉移酶具有至少70%的同一性。

7.一種(變體)脂質酰基轉移酶多肽，其由前述任一項權利要求的方法獲得。

8.編碼脂質酰基轉移酶的核酸，其核苷酸序列包含位置對應于所編碼的氨基酸序列中一個或多個以下位置的至少一個修飾：第27、31、85、86、122、119、120、122、201、235、232、236、245、232、235、236位，其中所述位置編號定義為當基于初級或三級結構比對時，對應于本文SEQ?ID?No.6所示的酶相同位置的位置。

9.如權利要求8所述的核酸，其中，所述核酸編碼具有脂質酰基轉移酶活性并且包含與SEQ?ID?No.6或16的成熟區具有至少94%氨基酸序列同一性的序列的多肽，并且其中所述多肽在位于以下位置的位置包含至少一個修飾：第27、31、85、86、122、119、120、201、245、232、235和/或236位，其中所述位置編號定義為當基于初級或三級結構比對時，對應于本文SEQ?ID?No.6所示的酶相同位置的位置。

10.編碼具有脂質酰基轉移酶活性的多肽的核酸，其中，所述核苷酸序列在中等或高嚴謹條件下與SEQ?ID?No.10或SEQ?ID?No.25，或者SEQ?ID?No.10或SEQ?ID?No.25的互補序列在基本全長上雜交，其中所編碼的多肽包含選自以下的一個或多個氨基酸殘基：第31位的Q、H、N、T、F、Y或C；第86位的R、Y、S、V、I、A、T、M、F、C或L；第27位的R、G、H、K、Y、D、N、V、C、Q、L、E、S或F；H、R、D、E?85；第119位的T或I；第120位的K或E；第122位的S、L、A、F、W、Y、R、H、M或C；第201位的R；第245位的S；第235位的A或V；第232位的G或S；第236位的G或E，其中所述位置是與SEQ?ID?No.6相當的氨基酸位置。

11.如權利要求8或9所述的核酸，其中，所述至少一個修飾在位于所述峽谷區中的氨基酸殘基中，并且選自一個或多個以下位置：27、31、85、86、119和120。