[發明專利]純化萬古霉素濕體的方法

有效

• 申請號: 200980154447.1
• 申請日: 2009-11-26
• 公開（公告）號: CN102272320B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發明（設計）人: 趙鎮淑;尹鐘遠;崔圻修;金正旻;崔豪埈;金成學;金成圭;金載鐘
• 申請（專利權）人: 基因科技有限公司
• 主分類號: C12P19/44
• 分類號: C12P19/44;C12P1/04;A61P31/04
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司11127
• 代理人: 龐東成

技術領域

本發明涉及一種采用反滲透純化萬古霉素濕體的方法，尤其是，本發明涉及一種純化萬古霉素濕體的方法，能避免制備萬古霉素過程中進行干燥步驟時，由較差的溫度穩定性引起的純度降低。

背景技術

萬古霉素的由下面的化學式I表示，它是由放線菌屬的微生物，即東方擬無枝酸菌(Amycolatopsis orienatalis)(ATCC 19795)菌株產生的。萬古霉素也可以通過將-O-萬古糖胺--O-葡萄糖(-O-vancosamin--O-glucosyl-)與七肽進行化學鍵接制備。此外，萬古霉素是分子量約1449的糖肽類抗生素，通過與末端為D-ala-D-ala的粘肽前體結合，從而抑制細胞壁合成的機理，來實現其抗生素活性。通常，萬古霉素對抑制如下菌群有很好的藥理學作用：革蘭氏陽性菌例如鏈球菌屬、葡萄球菌屬、梭狀芽胞桿菌，以及對青霉素或頭孢霉素有抗生素抗性的革蘭氏陽性菌。

【化學式I】

另外，眾所周知，萬古霉素在抑制耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的治療方面非常有效，該菌對手術病人、老年和低免疫力病人是致命的。該萬古霉素鹽，尤其是鹽酸萬古霉素當前已經用作口服(液體或者膠囊)或注射制劑。

至今，已經知道多種分離純化萬古霉素的技術方法，其中典型的例子如下：

美國專利號7,018,814和韓國專利號554481公開的一種純化鹽酸萬古霉素的方法，包括：(a)將含有萬古霉素的微生物發酵液在pH 1-3的條件下，通過強酸陽離子交換樹脂，以pH 9-11且濃度為0.05-0.2N的氫氧化銨水溶液作為洗脫劑；(b)將得到的溶液pH調至3-5，將其連續通過弱堿性的陰離子交換樹脂和氧化鋁柱，隨后用水沖洗，去除色素；(c)將得到的溶液通過疏水吸附樹脂，用C1-C4醇的水溶液作為洗脫劑；(d)通過在得到的溶液中加入鹽酸，將pH調到2-5，再加入包括C1-C4醇、乙腈、丙酮或者甲基異丁基甲酮的水溶性有機溶劑以使鹽酸萬古霉素結晶。

根據上述專利所述，通過分離純化含有萬古霉素的微生物發酵液中的結晶步驟來獲得結晶體，過濾結晶體，取過濾沉淀物(結晶體)進行真空干燥(比如在40℃或更低的溫度進行真空干燥)以獲得鹽酸萬古霉素。

美國專利No.5,853,720公開了一種純化萬古霉素的方法，包括將微生物發酵液經過采用硅膠柱的制備色譜處理，再用乙醇將其從鹽-水-乙醇混合溶液中沉淀出來。根據上述專利，在培養-精密過濾-離子交換樹脂吸附后，從硅膠柱得到主要餾分(平均純度：93％)和次要餾分(純度90％或更低)。對于主要餾分，進行濃縮-過濾-濃縮和脫色，然后進行高溫噴霧干燥(進氣口溫度：115-130℃，出氣口溫度：85±5℃)、真空干燥(45-50℃)，得到干燥的固體產物。另一方面，對于次要餾分，酸化后通過反滲透過程進行脫鹽、濃縮，添加乙醇和氯化鈉之后，用醇沉淀(結晶)，然后進行冷卻和過濾，接著將得到的產物重新進入硅膠柱，進行與主要餾分相同的處理。就上述的純化過程來看，包括了相對大量的步驟(至少7到11步)。盡管上述專利描述了在用硅膠柱處理后獲得的萬古霉素(鹽)的純度，但沒有描述在隨后的步驟中(尤其是反滲透過濾步驟和真空干燥步驟)純度的改變。正如下文中所描述的，盡管通過上述過程能獲得純度為93％或更高的萬古霉素，但在隨后的干燥過程(尤其是高溫噴霧干燥，45-50℃時進行的真空干燥)中純度會下降。因此難以獲得符合歐洲藥品標準規定純度的產物，即純度93％或更高。

然而，根據相關技術，上述方法引起如下這樣的問題，在1-2天的真空干燥中至少3.2％，至多5.6％的純度降低，以及萬古霉素穩定性的降低。另外，當真空干燥步驟在降低的25℃溫度下進行時，同樣的時間內，純度變化僅僅小于1％，但得到的產物含有雜質，包括至少0.5％的乙醇以及高達4-10％的水分。

如上所述，萬古霉素是對溫度敏感的藥物，因此45-50℃的真空干燥不能確保純度方面的穩定性。另一方面，真空干燥溫度降低到40℃或更低不能滿足乙醇含量和含水量標準。因此，在傳統的純化過程中，將這樣的真空干燥作為制備干燥產物的最后一步，對于高效生產穩定的高純度的萬古霉素是不合適的。并且，根據相關技術，上述專利僅強調分離和純化過程，并沒有特別描述由干燥步驟引起的穩定性和純度降低問題。