[發明專利]哺乳動物表達載體

無效

• 申請號: 200980151764.8
• 申請日: 2009-12-18
• 公開（公告）號: CN102264908A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: A·弗蘭基;D·戈賽爾
• 申請（專利權）人: 力奇制藥公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/90
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;林柏楠

1.一種包含以下調控元件的哺乳動物表達載體：

(a)猿猴病毒40增強子和早期啟動子區和

(b)Hbb內含子II，或其片段、衍生物和修飾物，

其中所述表達載體能夠接納至少一個目的基因并使其表達。

2.權利要求1的載體，其中所述Hbb內含子II顯示SEQ?ID?NO：1的序列。

3.權利要求1或2的載體，其中所述載體還包含至少一個編碼真核和/或原核選擇標記的基因，特別是其中至少一個真核選擇標記基因是來自Tn5的新霉素磷酸轉移酶基因和/或二氫葉酸還原酶基因。

4.前面權利要求中任一項的載體，其中所述載體為環形和/或包含處于權利要求1(a)和(b)中定義的調控元件控制下的至少一個目的基因。

5.權利要求4的載體，其中所述載體包含至少一個目的基因并且其中所述至少一個基因編碼免疫球蛋白輕鏈和/或免疫球蛋白重鏈。

6.權利要求1至5中任一項的載體，其中所述調控元件，目的基因和編碼選擇標記的基因的順序如下：5′-SV40增強子/早期啟動子區，Hbb內含子II，或其片段、衍生物和修飾物，編碼免疫球蛋白輕鏈的基因，SV40多聚腺苷酸化信號序列；SV40增強子/早期啟動子區，Hbb內含子II，或其片段、衍生物和修飾物，編碼免疫球蛋白重鏈的基因，SV40多聚腺苷酸化信號序列；SV40增強子/早期啟動子區，Tn5新霉素磷酸轉移酶基因，合成的多聚腺苷酸化信號序列；SV40早期啟動子，二氫葉酸還原酶基因，SV40多聚腺苷酸化信號序列-3′。

7.權利要求1至6中任一項的載體，其中所述載體為顯示9555bp的序列的pDGPΔGOI載體，其一條鏈由SEQ?ID?NO：2代表。

8.一種載體系統，其包含至少兩個如在權利要求3或4中定義的載體，其中所述至少兩個載體各自包含至少一個目的基因。

9.權利要求8的載體系統，其中位于第一個載體上的第一個目的基因編碼免疫球蛋白輕鏈，位于第二個載體上的第二個目的基因編碼免疫球蛋白重鏈。

10.一種載體系統，其包含至少兩個載體，其中第一個載體如權利要求1或2中定義并且其中第二個載體包含編碼賦予轉染細胞抗性的選擇標記的至少一種基因。

11.權利要求10的載體系統，其中所述第一個載體為顯示3830bp序列的pDGP-AΔGOI載體，其一條鏈由SEQ?ID?NO：3代表。

12.哺乳動物細胞，其包含權利要求3至7中任一項的表達載體或包含權利要求8至11中任一項的載體系統。

13.權利要求12的細胞，其中所述細胞為COP細胞、L細胞、C127細胞、Sp2/0細胞、NS-0細胞、NS-1細胞、NIH3T3細胞、PC12細胞、PC12h細胞、BHK細胞、CHO細胞、COS1細胞、COS3細胞、COS7細胞、CV1細胞、Vero細胞、HeLa細胞、HEK-293細胞、PER?C6細胞，或來自二倍體成纖維細胞、骨髓瘤細胞和HepG2的細胞。

14.一種產生權利要求12的細胞的離體方法，所述方法包括對哺乳動物細胞提供權利要求3至7中任一項的表達載體或權利要求8至11中任一項的載體系統的步驟。

15.一種生產至少一種目的多肽的方法，其中所述方法包括在允許表達所述至少一種目的多肽的條件下在細胞培養基中培養權利要求12的細胞的步驟。

16.權利要求15的方法，其中所述至少一種目的多肽被分泌至細胞培養基并且所述方法還包括從細胞培養基中分離所述至少一種目的多肽的步驟。