[發明專利]從表達外來基因的蠶的繭制絲的方法及使用該方法生成的產品

無效

• 申請號: 200980150796.6
• 申請日: 2009-10-19
• 公開（公告）號: CN102257192A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 高林千幸;田村俊樹;町井博明;飯塚哲也;瀬筒秀樹;立松謙一郎;木下晴夫;宮崎榮子;山田勝成;栗原宏征;朝倉哲郎;桑原伸夫;山口純次;中村敬;吉井圭;宮脅敦史;唐澤智司;青木里步
• 申請（專利權）人: 獨立行政法人農業生物資源研究所
• 主分類號: D01B7/00
• 分類號: D01B7/00;A01K67/033;A61L17/00;A61L27/00;D01B7/04;D01F9/18
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 羅天樂

發明領域

本發明涉及用于從表達外來基因的蠶的繭制絲的方法及可以通過該方法獲得的產品。更具體而言，本發明涉及在從表達外來基因的蠶繭抽出蠶絲的步驟中在不導致表達外來基因的蠶繭特性喪失的同時進行繭干燥、煮繭和繅絲的技術。

發明背景

活繭中的蠶蛹若任其自由則會變態成蠶蛾，擠穿由繭絲構成的繭殼的繭絲，并作為蠶蛾從繭殼脫出。由于這樣會使繭無法繅絲，所以必須在蛾離開繭殼前將蛹殺死并干燥蠶繭。通常，通過設置初始溫度至115℃或更高(在某些情況下至130℃或更高)，然后在5至6小時內逐漸向下降低溫度至60℃來干燥蠶繭。

煮繭通常使用進行式煮繭機(progressive-type?cocoon?cooking?machine)來進行。如下實施煮繭：首先于約40℃的溫度浸泡繭絲；然后實施高溫滲透處理，包括高于100℃的溫度的蒸汽處理；接著進行低溫滲透處理，包括將繭絲放置于約75℃的低溫部中；然后實施蒸汽接觸處理，包括另一次蒸汽處理；此后進行調節處理，包括將溫度從沸騰溫度逐漸降低至約60℃等。如此，在煮繭中，通過用蒸汽、近沸騰熱水、和低溫水組合處理來實施蒸汽和熱水進出繭腔(cocoon?cavity)的轉移。這導致繭層絲膠蛋白(一種包被繭絲的水溶性蛋白質)的膨脹和軟化，而且改善繭絲自繭的分離。

在繅絲(reeling)中，通過索緒(brushing)抽出細絲末端，索緒即使用稻穗尖端從大約90℃溫度的熱水中放置的繭抽出細絲末端。

此類常規制絲方法中，蠶絲蛋白質遭受高溫所致的熱變性。結果導致蠶絲的染料親和力和織物質地受到損害。近幾年來在進行含有外來蛋白質的蠶繭的生產，對在不損害外來蛋白質特性的同時從繭產生生絲的技術存在需求。

下文列示本發明的現有技術文件。

[現有技術文件]

[專利文件]

[專利文件1]Low-Temperature?Chemical?Cocoon?Boiling?Apparatus：Matsumoto，T.，Masago，Y.，Katsuno?M.日本實用新型申請公布號S55-11197

[專利文件2]Vacuum?Cocoon?Boiler：Nishio，M.(授權/登記)日本專利號S49-13926

發明概述

本發明要解決的問題

本發明是鑒于上述情況完成的。本發明的目的是提供一種用于在不損害外來蛋白質特性、且不使絲心蛋白蛋白質和絲膠蛋白蛋白質遭受熱變性的同時，從表達外來基因的蠶繭產生生絲的方法。

用于解決問題的手段

為了解決上文所提及的問題，本發明人嘗試了在比那些常規使用的溫度條件低的溫度條件(大約80℃或更低)下，而不是迄今為止在從繭生成生絲時使用的高于100℃的條件下進行繭的干燥。此外，在煮繭中，嘗試了在低于常規溫度的溫度且在真空條件(減壓處理)下的滲透處理，而不是常規采用的于100℃或更高的高溫蒸汽處理或用近沸點熱水的處理。作為一種備選的繭煮沸方法，嘗試了進行組合處理，包括利用堿使絲膠蛋白膨脹，并借助表面活性劑、酶等使熱水滲透入繭層中。此外，本發明人嘗試了在比常規溫度低的溫度進行繅絲。

結果，本發明人發現，可以在不損害表達外來基因的蠶繭中所含的外來蛋白質的特性且不使絲心蛋白蛋白質和絲膠蛋白蛋白質遭受熱變性的同時，從絲腺中表達外來基因的蠶繭生成生絲。本發明基于該發現，提供了下文所描述的[1]至[18]：

[1].一種從由轉基因蠶所結的繭產生生絲的方法，其中該方法包括使用包含堿劑、表面活性劑、酶等中的至少一種的低溫溶液來進行真空滲透。

[2].[1]的方法，其中該方法包括下列步驟：

(a)干燥由絲腺中包含外來蛋白質的轉基因蠶所結的繭；

(b)在包含堿劑和表面活性劑或包含酶和表面活性劑的溶液中浸泡步驟(a)的繭；

(c)在包含堿劑和表面活性劑或包含酶和表面活性劑的溶液中真空滲透步驟(b)的繭；

(d)使步驟(c)的繭真空脫水；

(e)在包含堿劑和表面活性劑或包含酶和表面活性劑的溶液中真空滲透步驟(d)的繭；

(f)在水中浸泡步驟(e)的繭；以及

(g)在低溫(大約50℃或更低)條件下自步驟(f)的繭繅絲。

[3].[2]的方法，其中在步驟(a)中，在大約80℃或更低的條件下干燥所述繭。

[4].[2]的方法，其中在步驟(a)中，在真空條件下干燥所述繭。