[發(fā)明專利]單和雙PEG IL10的生產(chǎn)和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200980150672.8
• 申請日: 2009-12-15
• 公開（公告）號(hào): CN102256625A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: S.J.布萊斯德爾;C.M.庫特勒;B.C.帕波雷洛;A.安布羅格利
• 申請（專利權(quán)）人: 先靈公司
• 主分類號(hào): A61K47/48
• 分類號(hào): A61K47/48
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;劉健

1.一種生產(chǎn)單和雙聚乙二醇化的IL-10的混合物的方法，其中至少一個(gè)PEG分子與IL-10的至少一個(gè)亞基的至少一個(gè)氨基酸殘基共價(jià)連接，所述方法包括：

a）?將1mg/ml至12mg/ml的IL-10蛋白與活化的PEG接頭反應(yīng)以使IL-10與PEG接頭的比例為1:1至1:7.7，反應(yīng)在0.75?mM至35?mM的還原劑的存在下，在約5.0至7.4的pH下和5℃至30℃的溫度下進(jìn)行12-15小時(shí)；和

b）?純化單和雙聚乙二醇化的IL-10的混合物。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述PEG接頭選自琥珀酰亞胺碳酸酯-PEG、PEG-丁醛、PEG-戊醛、PEG-酰胺基-丙醛、PEG-氨酯基-丙醛和PEG-丙醛。

3.權(quán)利要求2的方法，其中所述PEG接頭為PEG-丙醛。

4.權(quán)利要求1的方法，其中包含所述PEG接頭的PEG分子量為從5,000道爾頓至20,000道爾頓。

5.權(quán)利要求4的方法，其中包含所述PEG接頭的PEG分子量為5,000道爾頓。

6.權(quán)利要求1的方法，其中所述還原劑選自硼氫化物、氰基硼氫化鈉、胺合硼烷絡(luò)合物和甲基吡啶硼烷。

7.權(quán)利要求6的方法，其中所述還原劑選自氰基硼氫化鈉和甲基吡啶硼烷。

8.權(quán)利要求1的方法，其中所述單和雙PEG的混合物通過選自陽離子交換、陰離子交換、大小排阻和疏水相互作用的層析純化。

9.權(quán)利要求9的方法，其中所述單和雙PEG-IL-10的混合物通過大小排阻層析純化。

10.一種包含由權(quán)利要求1的方法生產(chǎn)的單和雙PEG-IL-10和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。

11.一種生產(chǎn)單和雙聚乙二醇化的IL-10的混合物的方法，其中至少一個(gè)PEG分子與IL-10的至少一個(gè)亞基的至少一個(gè)氨基酸殘基共價(jià)連接，所述方法包括：

a）將7.5mg/ml的IL-10與活化的PEG接頭反應(yīng)以使IL-10與PEG接頭的比例為1:3.5，反應(yīng)在25mM的還原劑的存在下，在6.3的pH下和15℃的溫度下進(jìn)行15小時(shí)；和

b）純化單和雙聚乙二醇化的IL-10的混合物。

12.權(quán)利要求11的方法，其中所述PEG接頭選自琥珀酰亞胺碳酸酯-PEG、PEG-丁醛、PEG-戊醛、PEG-酰胺基-丙醛、PEG-氨酯基-丙醛和PEG-丙醛。

13.權(quán)利要求12的方法，其中所述PEG接頭為PEG-丙醛。

14.權(quán)利要求11的方法，其中包含所述PEG接頭的PEG分子量為從5,000道爾頓至20,000道爾頓。

15.權(quán)利要求14的方法，其中包含所述PEG接頭的PEG分子量為5,000道爾頓。

16.權(quán)利要求11的方法，其中所述還原劑選自硼氫化物、氰基硼氫化鈉、胺合硼烷絡(luò)合物和甲基吡啶硼烷。

17.權(quán)利要求16的方法，其中所述還原劑選自氰基硼氫化鈉和甲基吡啶硼烷。

18.權(quán)利要求11的方法，其中所述單和雙PEG的混合物通過選自陽離子交換、陰離子交換、大小排阻和疏水相互作用的層析純化。

19.權(quán)利要求18的方法，其中所述單和雙PEG的混合物通過大小排阻層析純化。

20.一種包含由權(quán)利要求10的方法生產(chǎn)的單和雙PEG-IL-10和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。