[發明專利]在鑲片鐮孢的酶缺陷突變體中產生多肽的方法

有效

• 申請號: 200980147258.1
• 申請日: 2009-09-30
• 公開（公告）號: CN102227502A
• 公開（公告）日: 2011-10-26
• 發明（設計）人: 杰弗里·沙斯基;溫迪·約德
• 申請（專利權）人: 諾維信股份有限公司
• 主分類號: C12N15/80
• 分類號: C12N15/80
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 史悅

1.一種產生多肽的方法，包括：

(a)在用于產生所述多肽的培養基中培養親本鑲片鐮孢(Fusarium?venenatum)菌株的突變體，其中所述突變體菌株包含編碼所述多肽的多核苷酸以及選自下組的一個或多個(幾個)基因：pyrG、amyA和alpA，其中所述一個或多個(幾個)基因經修飾使得所述突變體菌株與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比分別在選自下組的一個或多個(幾個)酶的產生中有缺陷：乳清苷-5’-單磷酸脫羧酶、α-淀粉酶和堿性蛋白酶；和

(b)從培養基回收所述多肽。

2.權利要求1的方法，其中所述突變體菌株還包含基因tri5和dps1之一或兩者，其中所述基因之一或兩者經修飾使得所述突變體菌株與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比分別在單族毒素(trichodiene)合酶和環己縮肽合成酶之一或兩者的產生中有缺陷。

3.權利要求2的方法，其中所述突變體菌株與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比少產生至少25％的單族毒素合酶和環己縮肽合成酶之一或兩者。

4.權利要求2的方法，其中所述突變體菌株與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比在單族毒素合酶和環己縮肽合成酶之一或兩者中是完全缺陷的。

5.權利要求1-4任一項所述的方法，其中所述多肽對于鑲片鐮孢菌株是天然的或外源的。

6.權利要求1-5任一項所述的方法，其中所述突變體菌株與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比少產生至少25％的選自下組的一個或多個(幾個)酶：乳清苷-5′-單磷酸脫羧酶，α-淀粉酶和堿性蛋白酶。

7.權利要求1-5任一項所述的方法，其中所述突變體菌株與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比在選自下組的一個或多個(幾個)酶中是完全缺陷的：乳清苷-5′-單磷酸脫羧酶，α-淀粉酶和堿性蛋白酶。

8.一種親本鑲片鐮孢菌株的突變體，包含編碼所述多肽的多核苷酸以及選自下組一個或多個(幾個)基因：pyrG、amyA和alpA，其中所述一個或多個(幾個)基因經修飾使得所述突變體菌株與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比分別在選自下組的一個或多個(幾個)酶的產生中有缺陷：乳清苷-5’-單磷酸脫羧酶、α-淀粉酶和堿性蛋白酶。

9.權利要求8的突變體菌株，其還包含基因tri5和dps1之一或兩者，其中所述基因之一或兩者經修飾使得所述突變體菌株與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比分別在單族毒素合酶和環己縮肽合成酶之一或兩者的產生中有缺陷。

10.權利要求9的突變體菌株，其與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比少產生至少25％的單族毒素合酶和環己縮肽合成酶之一或兩者。

11.權利要求9的突變體菌株，其與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比在單族毒素合酶和環己縮肽合成酶之一或兩者中是完全缺陷的。

12.權利要求8-11任一項所述的突變體菌株，其中所述多肽對于鑲片鐮孢菌株是天然的或外源的。

13.權利要求8-12任一項所述的突變體菌株，其與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比少產生至少25％的選自下組的一個或多個(幾個)酶：乳清苷-5′-單磷酸脫羧酶，α-淀粉酶和堿性蛋白酶。

14.權利要求8-12任一項所述的突變體菌株，其與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比在選自下組的一個或多個(幾個)酶中是完全缺陷的：乳清苷-5′-單磷酸脫羧酶，α-淀粉酶和堿性蛋白酶。

15.一種獲得親本鑲片鐮孢菌株的突變體的方法，包括：

(a)修飾選自下組的一個或多個(幾個)基因：pyrG、amyA和alpA；和

(b)鑒定來自步驟(a)的突變體菌株，其中所述選自下組的一個或多個(幾個)基因：pyrG、amyA和alpA經修飾使得所述突變體菌株與在相同條件下培養的親本鑲片鐮孢菌株相比分別在選自下組的一個或多個(幾個)酶的產生中有缺陷：乳清苷-5’-單磷酸脫羧酶、α-淀粉酶和堿性蛋白酶。