[發明專利]羊水細胞及其用途

有效

• 申請號: 200980146959.3
• 申請日: 2009-10-23
• 公開（公告）號: CN102224241A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發明（設計）人: 勞拉·佩林;羅格·德菲利波;大衛·沃伯頓
• 申請（專利權）人: 洛杉磯兒童醫院
• 主分類號: C12N5/02
• 分類號: C12N5/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 顧晉偉;韓宏星

相關申請?

本申請要求2008年10月24日提交的美國臨時申請61/108,313的優先權，該申請通過引用并入本文。?

技術領域

本發明涉及從羊水中獲得的干細胞和祖細胞以及其分離、培養、分化方法及其用途領域。

背景技術

急性和慢性腎臟疾病是全世界的重大健康問題。患有終末期腎病(end-stage?renal?disease，ESRD)患者的數量在發達國家和發展中國家中不斷增加(Thadhani等，1996)。如美國腎臟數據系統2005年年度數據報告所報道，超過400,000美國人患有ESRD，并且超過20,000人正等待腎移植。根據對2020年的預測，預期將有超過500,000美國人患ESRD。

使用羊水作為胎兒遺傳性和先天性疾病的安全可靠的篩選工具已經有許多年。在妊娠期中，羊水的體積和組成隨著發育中胎兒的生理變化而改變。已經表明羊水的分子組成和營養物質的存在對多種腸細胞類型(例如上皮細胞和粘膜細胞)的增殖和分化具有關鍵作用(Cellini等，2006)。

羊水與發育中胎兒的隔室(例如肺和胃腸道)之間的接觸可以解釋羊水環境中不同細胞類型的存在。已經在羊水中發現了來源于所有3個胚層的成熟細胞系，包括間充質細胞、造血細胞以及表達來自特定組織類型(例如腦、心臟和胰腺)之蛋白和多種標志物的細胞(Hoehn和Salk，1982；Gosden，1983；Torricelli等，1993)。但是還需要進一步研究，以根據其來源和功能對這些細胞進行完全分類(Tsangaris等，2004；Bossolasco等，2006；McLaughlin等，2006)。

發明內容

申請人已經通過隨著時間跟蹤其存在和研究羊水細胞組成在妊娠期間發生的變化對羊水總細胞群進行了表征，集中研究了來源于3個胚層的細胞和器官的祖細胞。已經從羊水中分離出顯示出腎臟祖細胞特性的細胞?亞群，包括腎小管和腎小球前體。

本發明的一個實施方案提供了經分離和純化的、來源于羊水的CD24和OB-鈣粘蛋白陽性腎臟祖細胞群。一個實施方案提供了來源于羊水之CD24和OB-鈣粘蛋白陽性腎臟祖細胞的克隆群。另一個實施方案提供了還表達E-鈣粘蛋白、腎病蛋白(nephrin)、TrkA、PDGFR-α、足糖萼蛋白(podocalixin)或其組合的細胞。在另一個實施方案中，所述細胞具有被誘導分化成后腎細胞、足細胞(podocyte)、腎小球細胞、近端和遠端腎小管上皮細胞、基質源性(stromogenic)間充質細胞或系膜細胞的能力。在一個實施方案中，可以在體內或離體誘導所述細胞群分化。

一個實施方案提供了一種組合物，其包含來源于羊水的CD24和OB-鈣粘蛋白陽性腎臟祖細胞群、以及可藥用載體和/或培養基。另一個實施方案提供了一種制備組合物的方法，包括將來源于羊水的CD24和OB-鈣粘蛋白陽性腎臟祖細胞或由其分化的后代與載體(例如細胞培養基)相混合。

另一個實施方案提供了一種產生來源于羊水之腎臟祖細胞群的方法，包括從羊水樣品中選擇CD24和OB-鈣粘蛋白陽性細胞。在一個實施方案中，利用抗CD24抗體和抗OB-鈣粘蛋白抗體(例如單克隆抗體、多克隆抗體或者與熒光團或磁性顆粒綴合的抗體)進行所述選擇。在另一個實施方案中，進一步對來源于羊水的CD24和OB-鈣粘蛋白陽性腎臟祖細胞進行針對E-鈣粘蛋白、腎病蛋白、TrkA、PDGFR-α、足糖萼蛋白或其組合的選擇。在一個實施方案中，所述選擇通過流式細胞術進行，例如熒光活化細胞分選或高梯度磁性選擇(high?gradient?magnetic?selection)。

一個實施方案提供了通過本文所述任一種方法制備的、經分離和純化的、來源于羊水的CD24和OB-鈣粘蛋白陽性腎臟祖細胞群。

另一個實施方案提供了一種使富含來源于羊水之腎臟祖細胞的細胞群增殖的方法，包括：從羊水樣品中選擇至少一個CD24和OB-鈣粘蛋白陽性細胞；將所述至少一個細胞加入到培養基中；以及使所述至少一個經選擇的細胞在培養基中增殖。在一個實施方案中，所述細胞還表達E-鈣粘蛋白、腎病蛋白、TrkA、PDGFR-α、足糖萼蛋白或其組合。

一個實施方案提供了一種使經分離和純化的、來源于羊水的CD24和OB-鈣粘蛋白陽性腎臟祖細胞群分化的方法，包括使所述細胞群與至少一種分化因子接觸，所述分化因子包括但不限于ATRA、維生素3、地塞米?松、BMP-7、多種不同類型的IV型膠原或其組合。