[發明專利]使用酶促反應和偶聯反應的肽合成

無效

• 申請號: 200980146237.8
• 申請日: 2009-11-19
• 公開（公告）號: CN102216324A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發明（設計）人: 彼得·珍·倫納德·馬里奧·奎德弗利格;蒂莫·努伊真斯;克勞迪婭·卡森;凱瑟琳娜·赫伯蒂娜·瑪麗亞·斯徹伯斯
• 申請（專利權）人: 帝斯曼知識產權資產管理有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12P21/02
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 肖善強

1.用于酶促合成肽的方法，所述方法包括由以下(i)和(ii)酶促制備酯或硫酯：(i)N-端受保護的氨基酸、N-端受保護的氨基酸C-端酯、N-端受保護的肽、或N-端受保護的肽C-端酯，和(ii)式HO-CX₂-Z所表示的醇、或式HS-CX₂-Z所表示的硫醇，

每個X獨立地表示鹵素原子或氫原子；且Z選自下組：包含至少兩個取代基的sp³-雜化的碳，所述取代基包含和sp³-雜化的碳直接連接的雜原子，和包含一個或兩個取代基的sp²-雜化的碳，所述取代基包含和sp²-雜化的碳直接連接的雜原子，

酯或硫酯的制備在以反應介質中液體重量為基礎包含2重量％或更少水的反應介質中進行；和

將制備得到的酯或硫酯與任選地C-端受保護的氨基酸或與任選地C-端受保護的肽酶促偶聯，從而在以反應介質總重為基礎包含2重量％或更少水的反應介質中合成肽。

2.根據權利要求1的方法，其中所述偶聯在存在用于催化所述酯或硫酯的制備的酶時進行。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述酯或硫酯的制備或所述偶聯由至少一種選自脂肪酶、酯酶和蛋白酶的酶催化。

4.根據權利要求3所述的方法，其中使用蛋白酶和選自脂肪酶和酯酶組的酶，其中至少這些酶之一催化所述酯或硫酯的制備，其他酶至少催化所述偶聯。

5.根據權利要求3所述的方法，其中所述酯或硫酯的制備以及所述偶聯均由選自脂肪酶、酯酶和蛋白酶組的單一酶催化。

6.根據權利要求3-5中任一項所述的方法，其中使用選自以下脂肪酶的組的脂肪酶，所述脂肪酶來自假絲酵母，優選地來自南極假絲酵母，尤其是南極假絲酵母脂肪酶B。

7.根據權利要求3-6中任一項所述的方法，其中所述蛋白酶選自下組：絲氨酸型羧肽酶，金屬羧肽酶，半胱氨酸型羧肽酶，絲氨酸內肽酶，半胱氨酸內肽酶，天冬氨酸內肽酶和金屬內肽酶。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述蛋白酶是選自枯草桿菌蛋白酶組的絲氨酸內肽酶，優選地是枯草桿菌蛋白酶Carlsberg。

9.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中使用至少一種被固定的酶。

10.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述酯的制備和所述偶聯在下述反應介質中進行，所述反應介質包含1.0重量％或更少水，尤其是0.5重量％或更少水，更尤其是0.1重量％或更少水。

11.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中Z是氨基甲酰基、三氟甲基或三氯甲基。

12.根據前述權利要求中任一項的方法，其中兩個X均表示氫。

13.根據前述權利要求中任一項的方法，其中所述酯或硫酯的制備在存在以下物質時進行：要與所制備的酯或硫酯偶聯的任選地C-端受保護的氨基酸或任選地C-端受保護的肽，和催化所述偶聯反應的酶。

14.根據權利要求1-12中任一項的方法，其中在制備了所述酯或硫酯之后添加所述任選地C-端受保護的氨基酸或任選地C-端受保護的肽。

15.根據前述權利要求中任一項的方法，其中進行所述偶聯時不首先從所述反應介質中分離所述制備得到的酯或硫酯。