[發明專利]免疫學測定方法和測定用試劑盒

無效

• 申請號: 200980142407.5
• 申請日: 2009-07-16
• 公開（公告）號: CN102203611A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發明（設計）人: 田中睦
• 申請（專利權）人: 愛芙樂賽制藥株式會社
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/53
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 盧曼;高旭軼

技術領域

本發明涉及使用結合有物質的微小粒子的免疫學測定方法。尤其涉及主要在工業、環境和臨床檢查領域中的、利用了抗原抗體反應的微量成分的免疫學測定方法以及免疫學測定用試劑盒。

背景技術

近年來，在臨床檢查等各種檢查中，正謀求自動化和測定時間的縮短。作為這樣的檢查方法，利用免疫反應的測定方法正在被廣泛使用來用于測定生物試料中的物質。作為免疫學測定方法，有放射免疫測定(RIA)法、酶免疫測定(EIA)法、比濁免疫測定法、乳膠凝集法、膠體金凝集法、免疫色譜法等多種方法。其中，乳膠凝集法或膠體金凝集法由于可在無需反應液的分離、洗滌操作的均相體系中測定，所以適于測定的自動化和在短時間內的測定。尤其是膠體金粒子為5nm～100nm的大小，其小于乳膠粒子，因而可用于更微量物質的測定(專利文獻1和2)。

這些測定方法中的主反應成分是結合了與被測定物特異地反應(例如結合)的物質的乳膠粒子或膠體金粒子等微小粒子。當與結合在微小粒子上的被測定物特異地反應的物質具有復數個與被測定物特異地反應的部位時，通過使與結合在微小粒子上的被測定物特異地反應的物質與被測定物反應，從而使微小粒子發生凝集，由該凝集程度算出被測定物的濃度。

但是，當與結合在微小粒子上的被測定物特異地反應的物質與被測定物特異地反應的部位只有一處時，即使該物質與被測定物反應，也只是在其一處發生反應(例如結合)，因而不發生微小粒子的凝集。因此，利用競爭法來測定被測定物，所述競爭法即通過使具有復數個與被測定物反應的部位的競爭體(competitor)在測定體系中共存，而使微粒發生凝集，測定依賴于被測定物濃度的凝集程度。

或者，示出如下方法：在通過使乳膠粒子或膠體金粒子等微小粒子(該微小粒子結合有復數個被測定物或被測定物的類似物)和物質(該物質是與被測定物特異地結合的物質)反應而發生凝集的反應體系中，通過共存被測定物，從而抑制其凝集反應，通過測定該抑制的程度來測定被測定物的方法(非專利文獻1)。在該方法中，當以單體形式使用抗體作為與被測定物特異地結合的物質時，由于被測定物、或者結合有復數個半抗原的乳膠粒子或膠體金粒子與抗體的結合而發生的凝集不充分，有時得不到實用的測定靈敏度。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2005-283250號公報

專利文獻2：日本特開2004-325192號公報

非專利文獻

非專利文獻1：山田滿廣，醫療和檢查機器及試劑(醫療と検查機器·試薬)，19卷，4號，523-528頁，1996年

發明內容

發明要解決的課題

本發明的目的在于提供一種測定方法和測定用試劑盒，所述方法為利用使用微小粒子的以往的反應體系的測定方法，即，在通過使乳膠粒子或膠體金粒子(該乳膠粒子或膠體金粒子結合有復數個被測定物或被測定物的類似物)與物質(該物質是與被測定物特異地結合的物質)反應來發生凝集的反應體系中，通過共存被測定物來抑制其凝集反應，并測定該抑制的程度的被測定物的測定方法，其中，使其測定靈敏度提高，而且可在更寬的濃度區域內測定被測定物。

解決課題的手段

本發明發現在上述測定方法中，不以單體形式使用與被測定物特異地結合的物質、而是使用結合有復數個該特異地結合的物質的復合體，從而顯著促進與結合有復數個被測定物或被測定物的類似物的微小粒子的凝集反應，被測定物的測定靈敏度顯著上升，從而完成了本發明。即，本發明是基于如下現象的測定方法：使上述復合體、結合有復數個被測定物或被測定物的類似物的微小粒子、和樣本中的被測定物在反應液中共存來使凝集反應發生，以依賴于源自樣本的被測定物的濃度的方式抑制凝集反應。

本發明提供測定樣本中的被測定物的方法，該方法包括

(a)將含有該被測定物的樣本、具有復數個與該被測定物特異地結合的物質的復合體、和在不溶性載體上結合有該被測定物或該被測定物的類似物的微小粒子混合的工序；和

(b)在由該工序(a)得到的該混合液中，測定該微小粒子的凝集反應的工序。

本發明還提供測定用試劑盒，該試劑盒包括

第一試劑，其包含具有復數個與被測定物特異地結合的物質的復合體；和

第二試劑，其包含在不溶性載體上結合有該被測定物或該被測定物的類似物的微小粒子。

在一個實施方式中，上述復合體是結合有復數個抗上述被測定物的抗體的物質。

在另一實施方式中，上述被測定物是半抗原，而且上述被測定物的類似物是半抗原結合蛋白。