[發(fā)明專利]定量蛋白質(zhì)系親和色譜樹脂的蛋白質(zhì)泄露的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200980140986.X | 申請(qǐng)日： | 2009-09-15 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN102187227A | 公開（公告）日： | 2011-09-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 卞南英 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 米利波爾公司 |
| 主分類號(hào)： | G01N33/68 | 分類號(hào)： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 永新專利商標(biāo)代理有限公司 72002 | 代理人： | 張曉威 |
| 地址： | 美國馬*** | 國省代碼： | 美國;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 定量 蛋白質(zhì) 親和 色譜 樹脂 泄露 方法 | ||
1.定量PrA系親和色譜樹脂的PrA泄露的方法，所述方法包括以下步驟：
(a)用一種或多種熒光標(biāo)記物標(biāo)記所述PrA系色譜樹脂；
(b)將標(biāo)記的樹脂分成相等的第一部分和第二部分；
(c)用適合的方法處理第一部分以從所述樹脂釋放標(biāo)記的PrA，并向所述第二部分加入過量的免疫球蛋白(Ig)；
(d)測(cè)量來自步驟(c)所述第一部分中經(jīng)處理的樹脂的熒光(FL消化物)和PrA濃度([PrA])；以及
(e)測(cè)量來自步驟(c)所述第二部分的樹脂Ig洗出液濃度([Ig])和Ig洗出液中的熒光信號(hào)(FLIg)，
其中通過計(jì)算{(FLIg)/((FL消化物)/[PrA]))}/[Ig]定量PrA泄露。
2.定量PrA系親和色譜樹脂的PrA泄露的方法，所述方法包括以下步驟：
(a)用一種或多種熒光標(biāo)記物標(biāo)記所述PrA系色譜樹脂；
(b)向標(biāo)記的樹脂加入過量的免疫球蛋白(Ig)并測(cè)量來自所述樹脂的樹脂Ig洗出液濃度([Ig])和Ig洗出液中的熒光信號(hào)(FLIg)；
(c)從所述樹脂除去殘留的Ig，然后用適合的方法處理所述樹脂以從所述樹脂釋放標(biāo)記的PrA；以及
(d)測(cè)量來自經(jīng)處理的樹脂的熒光(FL消化物)和PrA濃度([PrA])，
其中通過計(jì)算{(FLIg)/((FL消化物)/[PrA])}/[Ig]定量PrA泄露。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白是IgG。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其進(jìn)一步包括用陽離子交換色譜、陰離子交換色譜和疏水交換色譜、弱分配色譜、羥基磷灰石色譜中的一種或多種或它們的任意組合除去洗出的PrA的步驟。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述熒光標(biāo)記物選自Alexa?Fluor?488、Dylight?488、HiLyte?Fluor?488、5-FAM，SE和6-FAM，SE。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述適合的方法包括化學(xué)處理。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述適合的方法包括酶處理。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述酶處理包括使用胰蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶和枯草溶菌素。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述化學(xué)處理包括使用酸或堿。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述PrA系色譜樹脂選自ProSep?A?High?Capacity、ProSep?A?Ultra、ProSep?Ultra?Plus、MabSelect、MabSelect?Xtra、MabSelect?Sure、Sepharose?Protein?A、Sartobind?Protein?A以及Protein?Sepharose?Fast?Flow。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中用熒光計(jì)測(cè)量所述熒光。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中用適合的pH洗脫所述Ig。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述Ig是單克隆的。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述Ig是多克隆的。
15.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述免疫球蛋白是IgG。
16.如權(quán)利要求2所述的方法，其進(jìn)一步包括用陽離子交換色譜、陰離子交換色譜和疏水交換色譜、弱分配色譜、羥基磷灰石色譜中的一種或多種或它們的任意組合除去洗出的PrA的步驟。
17.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述熒光標(biāo)記物選自Alexa?Fluor?488、Dylight?488、HiLyte?Fluor?488、5-FAM，SE和6-FAM，SE。
18.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述適合的方法包括化學(xué)處理。
19.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述適合的方法包括酶處理。
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