[發明專利]Δ6去飽和酶及其在制備多不飽和脂肪酸中的用途

有效

• 申請號: 200980139225.2
• 申請日: 2009-07-30
• 公開（公告）號: CN102171345A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: N·S·亞達夫;Z·薛;Q·朱;H·張
• 申請（專利權）人: 納幕爾杜邦公司
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/02;C12N15/81;C12P7/64
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;李連濤

1.分離的核酸分子，其包含編碼Δ6去飽和酶的核苷酸序列，所述分離的核酸分子選自：

(a)編碼如SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列的分離的核酸分子；

(b)在以下雜交條件下與(a)雜交的分離的核酸分子：0.1X?SSC，0.1％?SDS，65℃，并且用2X?SSC，0.1％SDS洗滌，隨后用0.1X?SSC，0.1％?SDS洗滌；或者，

與(a)或(b)完全互補的分離的核酸分子。

2.權利要求1的分離的核酸分子，其中至少227個密碼子經密碼子優化以在耶氏酵母屬中表達。

3.權利要求1的分離的核酸分子，所述分離的核酸分子選自SEQID?NO：1和SEQ?ID?NO：46。

4.分離的核酸分子，所述分離的核酸分子包含編碼至少471個氨基酸的Δ6去飽和酶的第一核苷酸序列，所述酶基于BLASTP比對方法在與具有如SEQ?ID?NO：2所示的序列的多肽進行比較時具有至少80％的同一性；

或包含第一核苷酸序列的互補序列的第二核苷酸序列。

5.編碼如SEQ?ID?NO：2所示的Δ6去飽和酶的多肽。

6.嵌合基因，其包含可操作地連接至少一種調控序列的權利要求1或4中任一項的分離的核酸分子。

7.包含權利要求1或權利要求4的分離的核酸序列的微生物宿主細胞。

8.權利要求7的微生物宿主細胞，其中所述微生物宿主細胞選自酵母、藻類、細菌、類眼蟲、原生藻菌、卵菌和真菌。

9.權利要求8的微生物宿主細胞，其中所述細胞是選自被孢霉屬(Mortierella)、破囊壺菌屬(Thraustochytrium)、和裂殖壺菌屬(Schizochytrium)的屬的成員。

10.權利要求8的微生物宿主細胞，其中所述細胞是含油的酵母。

11.權利要求10的微生物宿主細胞，其中所述含油酵母是選自下組的屬的成員：耶氏酵母屬(Yarrowia)、假絲酵母屬(Candida)、紅酵母屬(Rhodotorula)、紅冬孢酵母屬(Rhodosporidium)、隱球酵母屬(Cryptococcus)、絲孢酵母屬(Trichosporon)和油脂酵母屬(Lipomyces)。

12.一種生產γ-亞麻酸的方法，所述方法包括：

a)提供表達權利要求1或權利要求4的核酸序列的微生物宿主細胞；以及

b)在產生γ-亞麻酸的條件下，在亞油酸源的存在下培養(a)的宿主細胞。

13.一種生產十八碳四烯酸的方法，所述方法包括：

a)提供表達權利要求1或權利要求4的核酸序列的微生物宿主細胞；以及

b)在產生十八碳四烯酸的條件下，在α-亞麻酸源的存在下培養(a)的宿主細胞。

14.根據權利要求12或13中的任一項的方法，其中：

a)所述分離的核酸分子具有選自SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：46的核酸序列；并且

b)所述宿主細胞是解脂耶氏酵母(Yarrowia?lipolytica)。