[發明專利]包含抗體替代卡帕輕鏈序列的構建體和文庫

無效

• 申請號: 200980134840.4
• 申請日: 2009-07-10
• 公開（公告）號: CN102149727A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 勞倫斯·霍羅威茨;拉梅什·R·巴特
• 申請（專利權）人: 航道生物技術有限責任公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C12N15/10
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張紅春

發明領域

本發明涉及包含抗體替代κ輕鏈序列的構建體和文庫。具體地，本發明涉及包含抗體替代κ輕鏈序列(任選地，與另一多肽諸如例如抗體重鏈和/或輕鏈域序列配偶的)的構建體及含有其的文庫。

發明背景

由B淋巴細胞所生成的抗體(Ig)分子是由重(H)鏈和輕(L)鏈構成的。H和L鏈的氨基端域的氨基酸序列是可變的(V_H和V_L)，尤其在形成抗原結合位點的三個高變區(CDR1、CDR2、CDR3)處。H和L鏈的裝配物通過L鏈的恒定區(C_L)和重鏈的第一恒定區(C_H1)之間的二硫鍵及通過V_H和V_L域之間的非共價相互作用而穩定化。

B淋巴細胞發育的各個階段以Ig基因基因座的重排狀態表征(參見例如Melchers，F.和Rolink，A.，《B-Lymphocyte?Development?and?Biology》，Paul，W.E.編，1999，Lippincott，Philadephia)。在人和許多動物(諸如小鼠)中，編碼抗體H和L鏈的基因是通過編碼V區各部分的基因片段以規定的有序方式的逐步體細胞重排而裝配的，其中μ重鏈在λ輕鏈之前(Burrows?PD和Cooper?MD，Curr?Opin?Immunol?9：239-44(1997)；Alt等，Immunol?Today?13：306-14(1992)；Bassing等，Cell?109Suppl.：S45-55(2002))。

已知輕鏈(LC)重排由經由前B細胞受體(pre-BCR)驅動的信號啟動，該受體由兩條重鏈(μHC)與兩條共價結合的由λ5和VpreB分子構成的替代輕鏈(SLC)聯合而形成。如此，B細胞的前體(前B細胞)已經在骨髓中被鑒定為這樣的淋巴細胞，它們生成μ重鏈，但是不是完全形成的輕鏈，而是表達一組分別稱為VpreB(1-3)和λ5的B譜系特異性基因。

人VpreB1的主要同等型(CAG30495)是一種長145個氨基酸的多肽。它具有Ig?V域樣的結構，但是缺乏典型V域的最后的β鏈(β7)，并且具有與任何其它蛋白質沒有顯示序列同源性的羧基端末端。VpreB2具有數種同等型，包括142個氨基酸的小鼠VpreB2多肽(P13373)、和長171個氨基酸的小鼠VpreB2序列剪接變體(CAA019641)。VpreB1和VpreB2序列已經披露于EP?0?269?127和美國專利No.5,182,205；Collins等，Genome?Biol.5(10)：R84(2004)；及Hollins等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA?86(14)：5552-5556(1989)。人VpreB3的主要同等型是一種長123個氨基酸的蛋白質(CAG30496)，其披露于Collins等，Genome?Biol.5(10)：R84(2004)。

VpreB(1-3)與另一種蛋白質λ5非共價結合。人λ5是一種209個氨基酸的多肽(CAA01962)，它攜帶與抗體輕鏈具有強烈同源性的Ig?C域樣結構和朝向其氨基端末端的兩個功能上獨特的區域，其中之一與Vλ域的β7鏈顯示了強烈的同源性。人λ5樣蛋白具有213個氨基酸(NP?064455)，而且與抗體λ輕鏈恒定區顯示約84％的序列同一性。

關于進一步的詳情，參見下列綜述文章：Karasuyama等，Adv.Immunol.63：1-41(1996)；Melchers等，Immunology?Today?14：60-68(1993)；及Melchers，Proc.Natl.Acad.Sci.USA?96：2571-2573(1999)。

VpreB和λ5多肽一起形成非共價結合的Ig輕鏈樣結構，其稱為替代輕鏈(surrogate?light?chain)或假輕鏈(pseudo?light?chain)。在早期前B細胞表面上，替代輕鏈與膜結合Ig?μ重鏈以二硫鍵連接，并與信號轉導物CD79a/CD79b異二聚物結合以形成B細胞受體樣結構，前B細胞受體(pre-BCR)。