[發明專利]用于測定待測物中所含的微生物的活菌數的懸浮用稀釋液和活菌數測定方法

無效

• 申請號: 200980132947.5
• 申請日: 2009-06-11
• 公開（公告）號: CN102131937A
• 公開（公告）日: 2011-07-20
• 發明（設計）人: 武藤正達
• 申請（專利權）人: 森永乳業株式會社
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

技術領域

本發明涉及一種在測定待測物中所含的微生物的活菌數時、為了將該待測物制成懸浮液而使用的懸浮用稀釋液和使用上述懸浮用稀釋液的活菌數測定方法。

本申請基于2008年6月24日在日本申請的日本特愿2008-164226號要求優先權，將其內容援引于此。

背景技術

雙歧桿菌作為有用的腸內細菌的一種而眾所周知，有很多關于其生理學意義的報告，在腸內產生乳酸、醋酸等有機酸并抑制有害菌增殖的作用、維生素的產生、免疫力的激活等已被弄清楚(非專利文獻1)。因此，為了攝取雙歧桿菌從而維持健康，正在開發酸奶、糕點類、飲料類、健康食品類等含有雙歧桿菌的各種食品(非專利文獻2)。另外，在嬰幼兒時期，母乳喂養的嬰幼兒雙歧桿菌占優勢，因此在日本以外，也正在開發含有雙歧桿菌的嬰幼兒奶粉等。

像這樣，為了顯示該食品中含有多少菌數，對含有雙歧桿菌的各種食品進行活菌數測定。

作為以往微生物的活菌數測定中使用的方法，通常使用以下方法：制備含有待測物的懸浮液，然后用稀釋液(生理鹽水等)逐級稀釋上述懸浮液，將其用傾注法(pour?method)、平板涂布培養法等培養法進行培養，對培養基中形成的菌落數計數。待測物為粉末狀(例如微生物的菌末、或奶粉等粉末制品)時，向該待測物中添加稀釋液并攪拌從而制備懸浮液。

所述以往方法直接對雙歧桿菌末進行活菌數測定時不存在問題，但當測定食品中配合的雙歧桿菌的活菌數時，得到的測定值偏差較大，并且，存在上述測定值為低于實際上所含的活菌數(實際菌數)的值的問題。所述問題在測定粉末制品、尤其是奶粉中配合的雙歧桿菌的活菌數時較為顯著。例如用以往方法測定奶粉中所含的雙歧桿菌的活菌數時，得到的測定值為大幅度低于實際上所含的活菌數(實際菌數)的值(例如實際菌數的60～70％左右)。

像這樣，由于無法準確地測定各種食品中配合的雙歧桿菌的活菌數，因此期待分析機構開發能夠得到準確的活菌數測定值的測定方法。

從上述情況來看，雖然沒有關于各種食品中雙歧桿菌的活菌數測定的法定方法，但非專利文獻3中作為發酵乳/乳酸菌飲料中雙歧桿菌的活菌數測定方法記載了社團法人全國發酵乳乳酸菌飲料協會推薦的方法。上述方法中，關于稀釋液，推薦使用食品衛生檢查指南中記載的厭氧性待測物稀釋液(以下稱為稀釋液(A)。)。另外，上述非專利文獻3中還記載了可以利用生理鹽水代替稀釋液(A)。

稀釋液(A)是由KH₂PO₄：4.5g、Na₂HPO₄：6.0g、L-半胱氨酸HCL·H₂O：0.5g、Tween80：0.5g、瓊脂：1.0g、純化水：1000mL組成的液體，在檢測腸道菌群中存在的厭氧性菌時被廣泛使用。

現有技術文獻

非專利文獻

非專利文獻1：光岡知足編著，“Bifidus?Research”，第1章，第9～14頁，Japan?Bifidus?Foundation(1994年)

非專利文獻2：光岡知足編著，“Bifidus?Research”，第7章，第267頁和第282頁，Japan?Bifidus?Foundation(1994年)

非專利文獻3：“Enumeration?method?for?bifidobacterium?within?fermented?milk?and?lactobacillus?beverages”，第6頁，the?Bifidobacterium?Testing?Methods?Review?Committee?of?the?Japanese?Association?of?Fermented?Milks?and?Fermented?Milk?Drinks(2000年)

發明內容

發明要解決的問題

然而，粉末制品的情況下，即使使用如上所述的稀釋液(A)或生理鹽水作為稀釋液，奶粉等粉末制品中配合的雙歧桿菌的活菌數的測定值也與上述一樣為大幅度低于實際菌數的值。

活菌數的檢測值偏低，從而，例如向嬰幼兒奶粉等粉末制品中配合雙歧桿菌時，需要向該粉末制品中加入標準值的數倍以上的雙歧桿菌等，從經濟方面來看也存在問題。

本發明是為了解決上述課題而進行的，其目的在于提供一種懸浮用稀釋液和活菌數測定方法，其在含有微生物的待測物、尤其是奶粉等粉末制品中所含的微生物的活菌數測定中能夠得到比以往更準確的測定值。